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Laboschriften module III
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caramestdag
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Name and Surname: Cara MestdagGroup: 1Cc
III. Methods and techniques in (analytical) biochemistry
III.A. Expression and purification of GFPUV
III.A. Step 1: Expression
Datum: 28/02/2023
Veiligheidsinformatie
Reagentia H- P-zinnen Belangrijkste gevaren/voorzorgen E- Afval-
zinnen classificatie categorie
Ampiciline 317 261 Kan allergische huidreactie geven E2 Biologisch
(100 µg mL-1) 334 272 Kan bij inademing allergie- of afval
280 astmasymptomen of
284 ademhalingsmoeilijkheden geven
302+352 ➔ vermijdt inademing
333+313 Draag beschermende
handschoenen en
adembescherming
Bij HUIDCONTACT spoelen
E. coli / / Mutanten, / Biologisch
XL1 Blue lozing in het milieu vermijden afval
Alle andere reagentia die worden gebruikt in dit hoofdstuk zijn niet gevaarlijk of worden in dergelijk
lage concentraties of volumes gebruikt en worden als dusdanig niet als gevaarlijk beschouwd.
Samenvatting: Er wordt altijd een labojas en veiligheidsbril gedragen in het laboratorium. Bij het
hanteren van Ampicilline (100 µg mL-1 ) worden handschoenen gedragen om huidreacties te
voorkomen. Wegens een zeer felle allergie aan ampicilline werd ook een isolatieschort en
mondmasker gedragen. Bij het gebruik van en E. coli XL1 Blue worden handschoenen gedragen
omdat het over mutanten gaan. Vermijd de lozing van en E. coli XL1 Blue in het milieu.
Procedure
Voor de procedure wordt verwezen naar de handleiding op pagina 57 en 58.
Bij het oppikken van de kolonie werd ook het tipje van de micropipet mee in 5mL LB gedaan. Voor
stap 2 hebben we niet gewacht tot een OD van 0,8. We gingen verder bij een OD van 0,587. Deze
waarde zou in orde moeten zijn want de cellen zouden dan in exponentiële fase moeten zijn.
Berekeningen en waarnemingen
Waarnemingen: Na de groei, die overnacht gebeurde waren de bacteriecellen troebel. De optische
densiteit bij 600nm is 0,12.
1
, Name and Surname: Cara Mestdag
Group: 1Cc
Berekening arabinose 0,05% (w/v)
We weten dat: Carabinose, begin = 10% (w/v)
Carabibnose, eind = 0,05 % (w/v)
Veind = 100mL
Gevraagd: Vbegin
Oplossing: We maken gebruik van de verdunningswet:
𝐶𝑎𝑟𝑎𝑏𝑖𝑛𝑜𝑠𝑒,𝑏𝑒𝑔𝑖𝑛 𝑉𝑏𝑒𝑔𝑖𝑛 = 𝐶𝑎𝑟𝑎𝑏𝑖𝑛𝑜𝑠𝑒,𝑒𝑖𝑛𝑑 𝑉𝑒𝑖𝑛𝑑
𝑤
1 𝐶𝑎𝑟𝑎𝑏𝑖𝑛𝑜𝑠𝑒,𝑒𝑖𝑛𝑑 𝑉𝑒𝑖𝑛𝑑 0,05% ( 𝑣 ) ∗ 100𝑚𝐿
⇔ 𝑉𝑏𝑒𝑔𝑖𝑛 = = 𝑤 = 0,5 𝑚𝐿
𝐶𝑎𝑟𝑎𝑏𝑖𝑛𝑜𝑠𝑒,𝑏𝑒𝑔𝑖𝑛 10% ( 𝑣 )
Er werd 0,5 mL stockoplossing arabinose toegevoegd aan 100mL cultuur.
2
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