Deze samenvatting is per week en met de bijbehorende lesdoelen weergegeven. In de samenvattingen worden zowel de ppt's als de informatie uit de boeken samengevoegd om zo antwoord te geven op de les/leerdoelen.
Test Bank for Molecular Cell Biology 8th Edition by Harvey Lodish, Arnold Berk, Chris A. Kaiser, Monty Krieger, Anthony Bretscher, Hidde Ploegh, Angelika Amon, Kelsey C. Martin
Test Bank for Molecular Cell Biology 8th Edition by Harvey Lodish, Arnold Berk, Chris A. Kaiser, Monty Krieger, Anthony Bretscher, Hidde Ploegh, Angelika Amon, Kelsey C. Martin
Molecular cell biology: Mind maps and important figures
All for this textbook (6)
Written for
Hogeschool Rotterdam (HR)
Biologie En Medisch Laboratorium Onderzoek
BCR11 (BCR11)
All documents for this subject (1)
Seller
Follow
snaijerdeanne
Reviews received
Content preview
Lesdoelen les 5.1
1. De student kan uitleggen welke diverse technieken nodig zijn voor het maken en toepassen
van plasmide-constructen en hoe deze worden toegepast in onderzoek naar cellulaire
functies.
Golden Gate klonering
Bij Golden Gate klonering kan in principe elk stuk DNA aan elk ander stuk DNA geligeerd worden,
want er kan zelf gekozen worden welke overhang gecreëerd wordt. Dit kan d.m.v. PCR worden
gedaan als de restrictie-sites zich niet in het DNA bevinden.
Type IIs restrictie-enzymen (5 bp herkenningssite) knippen naast de herkenningssite en er ontstaan
geen scars. Omdat zelf de overhang wordt bepaald kunnen meerdere fragmenten tegelijk worden
gekloneerd. De herkenningssites moeten voor de RE en bij voorkeur niet in het eindproduct.
Ook mogen er geen polymerases aanwezig zijn, omdat deze kunnen blunten en hierdoor de
fragmenten op iedere plek in elke oriëntatie geligeerd kunnen worden.
Voorbeeld van een restrictie site die vaak gebruikt word is BsaI/BbsI en het is verstandig om geen
restrictie enzymen te kiezen die in 2+ sites knippen.
In de primer: fantasiestukje (4bp)-BsaI site-extra overhang (4bp)
Zodra polymerase de exonuclease inhaalt begint de DNA ligase en dit kan de uiteinden aan elkaar
ligeren. Het proces werkt alleen bij cirkels dus plasmiden.
Gibson klonering
Gibson Cloning maakt geen gebruik van restrictiesites. Er wordt gebruik gemaakt van een 5`-> 3`
nuclease (T5 exonuclease). Deze verwijdert vanaf de 5` kant steeds basen. Je krijgt dan een 5`
teruggetrokken (retracted) uiteinde. Je kunt het ook beschrijven als een 3` uitstekend uiteinde.
Wanneer twee DNA fragmenten gelijke sequenties bevatten maar aan verschillende uiteinden (de
één links en de ander rechts) dan ontstaat er een situatie waarbij de bovenste streng van de een (3`
overhang) past, en dus annealt, op de onderste streng van de ander (ook 3` overhang!). Op dat
moment komt een polymerase in actie. Deze moet sneller aanvullen dan dat de exonuclease af-eet!
Hij moet deze namelijk inhalen! Zodra hij de plaats waar de exonuclease bezig is heeft bereikt, kan
een derde enzym, de ligase de uiteinden aan elkaar ligeren. Vanaf dat moment zijn zowel de
exonuclease als de polymerase op die plaats uitgewerkt.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller snaijerdeanne. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $5.75. You're not tied to anything after your purchase.
