100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting Moleculaire technieken Blok 1 EN blok 2 course 5 $6.74
In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)
  4.  
  5. Moleculaire technieken (BM5BC_MOL_TECH)

Samenvatting

Samenvatting Moleculaire technieken Blok 1 EN blok 2 course 5

2 beoordelingen
 9 keer verkocht
  • Vak
  • Moleculaire technieken (BM5BC_MOL_TECH)
  • Instelling
  • Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)
  • Boek
  • iGenetics: Pearson International Edition

Deze samenvatting bevat alle colleges van moleculaire technieken van heel course 5. In deze samenvatting is duidelijk onderscheid gemaakt tussen blok 1 en blok 2. Blok 1 kan worden getoetst tijdens de kennistoets en blok 2 bij de thematoets van course 5. Alle technieken die van toepassing zijn gew...

[Meer zien]

Voorbeeld 4 van de 49  pagina's

Document informatie

  • Ja
  • 18 april 2021
  • 49
  • 2020/2021
  • Samenvatting

Onderwerpen

  • pcr
  • gel elektroforese
  • primers
  • annealing temperatuur
  • polymerase
  • mcs
  • expressie
  • inhibitor
  • vector
  • ion exchange

Gekoppeld boek

book image

Titel boek:

Auteur(s):

  • Uitgave:
  • ISBN:
  • Druk:

Geschreven voor

  • Hogeschool Arnhem en Nijmegen (HAN)
  • Biologie En Medisch Laboratoriumonderzoek
  • Moleculaire technieken (BM5BC_MOL_TECH)
Alle documenten voor dit vak (4)

2  beoordelingen

review-writer-avatar

Door: huyentran • 2 jaar geleden

review-writer-avatar

Door: marlinde1 • 2 jaar geleden

Verkoper

avatar-seller
sammessing

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

Kloneren: meerdere kopieën van een bepaald gen maken.




IDH1 gen in plasmide plaatsen door middel van restrictie. Om dat te kunnen doen moeten we het
IDH1 gen vermeerderen en restrictie sites aan plakken met behulp van PCR. Als je restrictie sites aan
je gen hebt gemaakt kun je die knippen, dan heb je je gen dat precies in de plasmide geplakt kan
worden en vervolgens in een bacterie zetten die het kan vermeerderen.

PCR
wat heb je nodig voor een PCR reactie?
- DNA template, zit het gen in
- DNA polymerase, enzym dat je nodig hebt om de
nucleotide in de nieuwe streng in te bouwen.
- Primers, want polymerase heeft iets nodig om op vast
te zitten. Startpunt voor DNA polymerase.
- Buffer, pH niveau stabiel houden. DNA polymerase is
een enzym en die heeft een bepaalde pH nodig om te
werken.
- MgCl2, is een zout dat DNA polymerase nodig heeft
om zijn werk te doen.
- dNTP, losse nucleotides die de DNA polymerase in
gaat bouwen in de streng.


DNA template
- plasmide DNA
- genomisch DNA uit de cel
- cDNA (mRNA uit de cel geïsoleerd en vervolgens via reverse trans omgezet naar cDNA) coderende
delen van het gen. Alle intronen zijn eruit.

Hoeveelheid DNA template moet niet te hoog maar ook niet te laag zijn. Te hoog verstoord PCR
reactie.


DNA polymerase
Taq DNA polymerase: uit warme bron bacterie, heft geen proofreading.
pfu DNA polymerase: proofreading activiteit. Maakt minder fouten

,Primer design.
Eerst de kanten van het DNA bepalen.




loaction

,Conditions for a good primer
* 50-60% CG. Meer waterstofbruggen vormen. Binden goed aan het DNA.
* 3’eind moet aan het uiteinde een C of G hebben, omdat de binding dan steviger is en dan kan de
polymerase dit als startpunt gebruiken.
* het kan zijn dat als er sequenties in je primer zitten die complementair zijn aan elkaar, kan de
primer zich dubbelvouwen. Dan kunnen die complementaire nucleotiden aan elkaar binden en dan is
hij niet bruikbaar want dan zit de primer dubbel gevouwen in plaats van dat hij op het DNA kan gaan
binden. Dat dubbelvouwen noemen we een hairpin formation.
* wat we ook niet willen is dat sequenties in zitten die aan elkaar gaan zitten  primer dimer
formation.
* afstand tussen de primers is 1 tot 2 kb, maar niet groter. Hangt wel af van het gen. (voor normale
PCR)
* Annealing temperatuur 55-65 graden Celsius. De temperatuur waarbij de primer goed en specifiek
op je DNA gaat vast zitten. Primers mogen niet te veel verschillen in de annealing temperatuur, niet
meer dan 5 graden celcius.

ATG is startcodon.
TGA is stopcodon.
Primers zijn tussen de 19-24 nucleotide

The PCR program
wat gebeurd er tijdens de stappen en waarom hebben we die nodig?
Denaturatie, annealing en elongatie




denatureren
annealing
elongatie

, Denatureren: DNA template uit elkaar smelten, zodat de primers kunnen binden.
Annealing: startpunt geven voor DNA polymerase om het DNA te verlengen.
Elongatie: verlengen van het DNA.
- deze stappen herhaal je een aantal keer.



Op welke temperatuur en waarom?
rond de 95 graden, maar het hangt af van de DNA polymerase die je gebruikt.
Primers annealing temperatuur: tussen de 55 en 65 graden afhankelijk van de primerset.
Elongatie temperatuur: 72 graden.
opslag tussen de 4 en 14 graden.

te hoge temperatuur?
DNA polymerase is een eiwit, dus deze kan niet tegen te hoge temperaturen en denatureert hij
zichzelf. Optimale temperaturen.
Annealing temperatuur: te laag?  de primers binden niet op de juiste plek aan het DNA template.
De moleculen bewegen namelijk niet zo hard.
temperatuur te hoog? De moleculen bewegen te hard waardoor de primers los laten.
elongatie/extension: hoge temperatuur zodat de polymerase er af gaat.

Wat gebeurd er als de annealing temperatuur tijdens PCR te laag is gezet voor de primers?
Dan krijg je a-specifieke binding en als je pech hebt een a-specifiek product

En een te hoge annealing temperatuur?
De moleculen bewegen teveel dat de primers losraken. Ze kunnen niet binden.  je krijgt geen PCR
product

Wat gebeurd er als de annealing temperatuur tijdens de PCR alleen maar goed is voor één primer?
De andere primer komt op de verkeerde plek te zitten, a-specifieke binding.




Plasmide in DNA
cloning vector

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper sammessing. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor $6.74. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 65040 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen

Laatst bekeken door jou

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

RECA Commercial Unit2 Exam Questions and Answers

Samenvatting ·

(0)

Beleidsinformatiesystemen - Quiz: hoofdstuk 2

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

DPM 1 Review Questions with solutions 2023

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

PMK-EE E7 CAREER INFORMATION EXAM 2023 SOLUTIONS

Samenvatting ·

(0)

Preguntas de desarrollo del 1º tri EBAU (CYL)

Samenvatting ·

(2)

Samenvatting bedrijfseconomie P2 (2022-2023)

Samenvatting ·

(2)

Samenvatting Nederlands Taalbeschouwing 2 deel 2

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

ENWC201 UD exam 2 Questions with Solutions

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

PMU EXAM QUESTIONS WITH COMPLETE SOLUTIONS!!

$6.74  9x  verkocht
  • (2)
In winkelwagen
Toegevoegd