GENETICA EN EVOLUTIE
HOOFDSTUK 10
PARAGRAAF 1
Blotting = een ‘in vitro’ methode om een
specifiek DNA-, RNA of eiwitmolecuul te
detecteren en kwantificeren
Southern blotting = blotting voor DNA
Northern blotting = blotting voor RNA
Western blotting = blotting voor eiwitten
Stap 1 blotting:
Gelelektroforese – methode om moleculen in een mengsel te onderscheiden op basis van hun
fysieke kenmerken (grootte, lading)
In een elektroforese is:
- De negatieve lading (kathode) boven
- De positieve lading (anode) beneden
- DNA en RNA zijn negatief geladen en worden dus door positieve lading aangetrokken
- Kleinere moleculen zullen sneller bewegen dan grotere moleculen
Kleinere moleculen liggen lager dan grotere moleculen
Moleculen met dezelfde grootte liggen even hoog
Stap 2 blotting:
De moleculen worden van de gel overgebracht naar een speciaal type papier (een membraan) dat
een hoge aantrekkingskracht heeft voor deze moleculen
, Stap 3 blotting:
Gebruik maken van een probe om een specifiek molecuul zichtbaar te maken op het membraan
De probe hecht zich vast aan complementaire nucleïnezuren – hybridisatie
Daarna vindt er autoradiografie plaats – membranen worden blootgesteld aan X-straling
Bij Western blotting (eiwit) zijn de probes antilichamen die binden aan specifieke eiwitten
IN VIVO:
Southern blotting: fluorescence in situ hybridization (FISH) – Een methode die fluorescent gelabelde
probes gebruikt om een specifieke DNA-sequentie in vivo te detecteren.
Northern blotting: in situ hybridization (ISH) – Detectie van RNA of DNA in vivo door hybridisatie met
radioactieve enkelstrengs nucleïnezuurprobes.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller femkesouren. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.95. You're not tied to anything after your purchase.