Samenvatting en uitwerking van het onderdeel Eiwitten en Enzymen van Moleculen. Bevat afbeeldingen uit de powerpoints en bijbehorende figuren bij de methoden. Verder bevat het uitwerkingen van de behandelde onderwerpen.
Eiwit onderzoek
- Sommige methoden zijn voor meerdere onderzoeken geschikt, maar niet allemaal.
Analytische methoden
- Doel: kwalitatief en kwantitatief onderzoek; welk eiwit is aanwezig en hoeveel is
daarvan aanwezig
Gelelektroforese
- Scheiding op lading en vorm/grootte
- v = (E x z) : f
- Snelheid = (sterkte elektrisch veld x lading eiwit) : wrijvingscoëfficiënt
- Dragermateriaal: polyacrylamide; moleculaire zeef. Dichtheid bepaalt welke grootte
eiwitten er doorheen kunnen lopen
- Verschillende typen gelektroforese:
SDS-PAGE
- Sodium dodecylsulfaat poly acryl gelelektroforese
- Het SDS denatureert de eiwitten, maakt het een lineaire vorm. Maakt de eiwitten
uniform negatief.
- Alleen scheiding op grootte
- β-mercatoethanol wordt gebruikt om zwavelbruggen te reduceren.
Iso-electric focussing (IEF)
- Polyacrylamide gel met pH gradiënt.
- Op het iso-elektrisch punt van het eiwit is de netto lading nul: het eiwit wordt net zo
hard naar - getrokken als naar +
-
2D elektroforese
- 1e dimensie IEF, 2e dimensie SDS-PAGE
- Van elk eiwit molmassa en iso-elektrisch punt kunnen bepalen
Preparatieve methoden
- Preparatieve methoden zijn gericht op het zuiveren van actief eiwit uit de cel/weefsel
- Eiwitten kunnen van elkaar gescheiden worden op basis van grootte, oplosbaarheid,
lading, bindingsaffiniteit
, - Doel: Het verkrijgen van een oplossing met een zo hoog mogelijke activiteit, met zo
min mogelijk verschillende eiwitten.
Dialyse: in- en uitzouten
- Principe: semi - permeabele membraan laat alleen kleine moleculen door
-
Gel-filtratie
- Kolom met gelbolletjes waar kleine eiwitten in kunnen binden. Je vangt fracties op.
De grote eiwitten komen als eerst uit de kolom.
-
Ionenwisselaar
- Eiwitten binden aan geladen gelbolletjes. De lading van het eiwit bepaalt de
bindingssterkte.
- Met een zoutgradiënt is de binding te verbreken: elutie
, -
(Ultra)-centrifugatie
- Met zeer hoge G krachten deeltjes scheiden.
- De sedimentatiesnelheid (bezinkingssnelheid) is afhankelijk van massa, vorm,
dichtheid van deeltje en dichtheid van oplossing.
-
- (^ gradiëntcentrifugatie)
Antilichamen
- Antilichamen worden gebruikt voor zuivering en detectie van eiwitten. Ze herkennen
een bepaald epitoop, die op een bepaald antigen zit.
- Een polyclonaal antilichaam zijn meerdere antilichamen die meerdere epitopen
herkennen.
- Een monoclonaal antilichaam is een zuiver antilichaam dat een type epitoop herkent.
- Monoclonale antilichamen hebben minder ‘contaminatie/vervuiling’, maar polyclonaal
herkent zelfde antigen in meerdere isovormen.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller suzanvankranenburg. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.41. You're not tied to anything after your purchase.
