Samenvatting deel celcultuur boekje H7-13 incl. notities tijdens hoorcollege
24 views 1 purchase
Course
Celcultuur En Immunochemie (FBD1049)
Institution
Universiteit Antwerpen (UA)
Book
Introductie in het kweken van dierlijke cellen
Deze samenvatting omvat het deel dat gegeven wordt door Professor Paul Cos zichzelf, het boek, informatie op ppt en notities tijdens de hoorcolleges. Behaald resultaat: 17/20.
Hoofdstuk 7: de celcultuuromgeving
-> artificiële omgeving, waarin de groei- en proliferatievereisten van de cellen zo goed mogelijk nagebootst worden
7.2 Co2-incubatoren
Cellen groeien optimaal in een aangepaste atmosfeer bij constante temperatuur, 5-10% Co2 en een hoge
relatieven vochtigheid (>95%)
Door gebruik van incubator kunnen deze parameters geregeld en opgevolgd worden
Types
Luchtmantelverwarming
Sneller beoogde temperatuur
Lichter
Bij eventuele stroompanne: warmte sneller verliezen + temperatuur niet homogeen verdeeld
Watermantelverwarming
Duurt langer om de kamer op te warmen
Zwaarder want ze moeten met water gevuld worden
Bij eventuele stroompanne: temperatuur zal langer behouden worden + temperatuur homogeen
verdeeld
Temperatuur
Meestal 37°C, koudbloedige vertebraten: 18-24°C
Controle: thermometer in de kamer met display aan buitenkant van de deur
Co2
Noodzakelijk voor behoud van pH medium dat vaak bicarbonaat gebufferd is
Co2 regulatie met interne sensor bv.: infrarode sensor (meest gevoelig en accuraat), ondervind geen invloed
door veranderingen in vochtigheid en temperatuur
o Te laag: opening inwendige klep, tekort aanvullen
o Kalibratie soms nodig
Vochtigheid
Pan met water onderaan, water verdampt en wordt via luchtcirculatie gelijkmatig verdeeld (schappen zijn
geperforeerd)
Hoge vochtigheidgraad: nodig voor osmolariteit van cellen op peil te houden
Grotere kans op microbiële contaminatie: gedemeniraliseerd water en wekelijks schoonmaken
Desinfectie en sterilisatie
CuSO4 tegen schimmels in het water (verspreiding)
Losse onderdelen worden gedesinfecteerd met 70% ethanoloplossing
o Soms ook via UV-lampen of peroxide dampen
Nieuwere incubatoren: sterilisatie met hete lucht (160-180°C)
Binnenkamer van koper is ook een optie
7.3 Laminaire luchtstroomkast (Laminaire Airflow of LAF-kast)
Lucht kan horizontaal of verticaal over het werkopp. geblazen worden
Steriele werkomgeving: lucht filteren van buiten af met HEPA-filter (High Efficiency Particulate Air)
Micro-organismen kunnen hierop niet overleven, andere deeltjes kunnen niet door deze filter
In EU geklasseerd volgens MPPS (most penetrating particle size)
Laminaire luchtstroom genereren, laminair airflow, snelheid van 0.45m/s
o Parallele stroomlijnen die een gegeven volume opvullen waardoor niks de omgeving kan binnendringen
of verlaten
o Bij horizontale luchtstroomkast: lucht blazen van achter
o Bij verticale luchtstroomkast: lucht blazen van bovenaf
, Horizontale luchtstroomkasten blazen de lucht, gevuld met aerosolen vanuit de kast in het gezicht van de
operator
o Ongeschikt voor werken met toxische of biologisch gevaarlijke agentia => zelden gebruik bij dierlijke
celkweek
Jaarlijks onderhoud:
o Controle op effectiviteit van desinfectieprocedures m.b.v. contactafdrukken m.b.v. Rodac-plaatjes
o Meten van luchtsnelheid en effectiviteit van hoofdfilter: gespecialisseerd bedrijf
Verticale luchtstroomkast: Indeling in klassen
Klasse I
o Bescherming: operator en omgeving
o Geen bescherming van het product
o Geen laminaire luchtstroom in de werkruimte
o 1 HEPA-filter
Klasse II
o Bescherming: operator, omgeving en product
o Steriele laminaire luchtstroom in de werkruimte
o 2 HEPA-filters
Klasse III
o Bescherming: operator, omgeving en product
o Volledig afgesloten van de omgeving: handschoenpoorten of luchtslot
o Onhandig: alleen gebruik bij risicoklasse 4 micro-organismen zoals Ebola Virus
Werken in een laminaire luchtstroomkast
10 minuten voor werkzaamheden aanzetten
Respecteer de werkhoogte glazenplaat
Werkoppervlak eerst met 70% ethanol ontsmetten, UV-lamp kan ook gebruikt worden
Opstelling
o Centrale open werkruimte
o Geen materiaal verborgen van oogpunt
7.4 Licht- en fluorescentiemicroscopie
Geïnventeerde fase-contrast microscoop
Bovenaan: lichtbron en condensor
Onderaan: objectieven
Systeem van ringen in de condensor en in het objectief wordt, door faseverschil te creëren, het beeld versterkt
ten opzichte van de achtergrond
Bij fasecontrast => niet nodig om de cellen te kleuren
Epifluorescentie
Fluorescerende stof (fluorofoor of fluorochroom)
o Exidatie met monochromatisch licht (korte golflengt, bv. blauw licht)
o Uitzenden van licht met langere golflengte, bv. groen licht
Toepassingen:
o Immunohistochemie (bv. eiwitten)
o In situ hybridisatie (nucleïnezuren)
GFP
= Green Fluorescent Protein (afkomstig van kwal Aequorea victoria)
Enchanged GFP of eGFP geeft sterker signaal dan wild-type GPF
Om dierllijke cellen in situ te bekijken met fluorescentie
Groene fluorescentie als ze worden blootgesteld aan blauw licht
Kleurmutanten: BGFP (blue), CGFP (cyan), YGFP (yellow)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller BMW2001. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.04. You're not tied to anything after your purchase.
