Thesis
Stageverslag eindstage 4e jaars chemisch-fysisch analist
- Course
- Institution
Dit verslag is op Fontys Hogescholen beoordeeld als hbo waardig (heb hiermee 6 maanden vrijstelling gekregen voor stage)
[Show more]
Seller
Follow
marjorie99
Content preview
Optimalisatie en validatievan de HPAEC-PAD
Marjorie Dalhuisen | Chemisch-fysisch analist | Jacobs Douwe Egberts
,Samenvatting
Jacobs Douwe Egberts produceert, onderzoekt en verkoopt koffie en thee
soorten. In het analytisch laboratorium worden fysische en analytische
analyses uitgevoerd. Voor de koffie word verwerkt tot verschillende soorten,
vinden eerst verschillende processen plaats waaronder het THEO proces.
Hierin word het percentage DoR bepaald met behulp van de HPLC-UV. De
voorbewerking van de HPLC-UV is erg complex en tijdrovend. Een andere
vorm van HPLC, de HPAEC-PAD, kan ook THEO metingen uitvoeren. Het
doel is dat de methode voor het meten van het percentage DoR in THEO
word overgezet van HPLC-UV naar HPAEC-PAD. Daarna word de methode
geoptimaliseerd door onder andere de analysetijd in te korten en een
factorbepaling uit te voeren. Als laatste word de nieuwe methode ook
gevalideerd om de betrouwbaarheid vast te stellen. In de toekomst zullen de
THEO koffies voortaan gemeten worden op de HPAEC-PAD.
Voor het optimaliseren van de methode zijn 5 verschillende testen
uitgevoerd.
Voor de eerste test is de flow aangepast. De flow kon maar tot een bepaalde
waarde verhoogd worden, omdat anders de maximumdruk van de kolom
overschreden werd. De verhoogde flow zorgde ervoor dat de retentietijd
flink innam. Door om te rekenen wat de nieuwe retentietijden worden na het
aanpassen van de flow, bleef de chromatografie hetzelfde en bleven de
pieken basislijn gescheiden.
Voor de tweede test is de kolomtemperatuur aangepast. Bij een verhoging
van de kolomtemperatuur, kwam de basislijn een stuk hoger te liggen.
Hierdoor verslechterde de chromatografie.
Voor de derde test zijn samenstellingen in het eluens gewijzigd. Hierbij werd
zichtbaar dat een lager percentage acetaat of natronloog ervoor zorgt dat
componenten vertraagd worden, waardoor pieken basislijn gescheiden
komen te liggen. Een hoger percentage kan gemakkelijk verontreinigingen
verwijderen.
Voor de vierde en vijfde test zijn de equilibriumstap aan het begin en de
spoelstap aan het einde verkort. Duidelijk werd dat de stappen niet
verwijderd konden worden, vanwege verontreinigingen en verdwaalde
pieken. Er waren meerdere injecties nodig om te achterhalen of de
verkortingen geen verontreinigingen meenamen in de volgende injectie.
Voor de validatie van de geoptimaliseerde methode zijn 7 verschillende
testen uitgevoerd.
Voor de eerste test werd de factorbepaling uitgevoerd. Hiervoor werd een
vergelijking opgesteld waarmee de resultaten van HPAEC-PAD naar HPLC-
UV kunnen worden omgerekend. Door de T-toets toe te passen werd
duidelijk dat de twee methodes met elkaar vergeleken mogen worden.
PAGE 1
,Voor de tweede test werd de dupliceerbaarheid gemeten. Hierbij werd
zichtbaar dat er over verschillende dagen door dezelfde analist acceptabel
en nauwkeurig word gemeten.
Voor de derde test werd de herhaalbaarheid gemeten. Hierbij was de
herhaalbaarheid tussen een monster die tien keer geïnjecteerd werd
minimaal.
Voor de vierde test werd de robuustheid gemeten. Hierbij werd zichtbaar
dat de DoR iets hoger komt te liggen naar mate de meetreeks vordert, maar
dit is verwaarloosbaar gezien de lage standaarddeviatie.
Voor de vijfde test werd de invloed van verschillende concentraties getest op
de DoR. Hierbij werd duidelijk dat bij een lagere concentratie de kans op
afwijkingen vergroot, waardoor de DoR minder constant en nauwkeurig
meet.
Voor de zesde test werd de invloed van tijd op het verloop van de DoR
getest. Hierbij kwam naar voren dat de DoR iets lager komt te liggen naar
mate de monsters 24 uur buiten de koelkast worden bewaard en opnieuw
gemeten worden.
Voor de laatste test werd de reproduceerbaarheid van de methode getest.
Hierbij werd duidelijk dat de nauwkeurigheid tussen de analisten iets
verschilt, maar de meetresultaten lagen dicht bij elkaar en konden gezien
worden als acceptabel en bruikbaar.
De optimale flow bleek 0,40 ml/min te zijn. De optimale kolomtemperatuur is
gebleven op 30°C. De samenstelling van het eluens in de eerste 10 minuten
is aan gradiënt van 7-7,5-11% natronloog en in de laatste 5 minuten een
percentage van 3% acetaat. De equilibriumstap aan het begin van de meting
is ingekort tot 5 minuten en aan het einde van de meting ingenomen tot 11
minuten. De geoptimaliseerde methode kende volledig basislijn gescheiden
pieken en een totale analysetijd van 43,3 minuten. De vergelijking voor het
omrekenen van meetresultaten van HPAEC-PAD naar HPLC-UV is y =
0.9996x + 16.063. De T-toets concludeert dat de twee methodes met elkaar
vergeleken mogen worden. De dupliceerbaarheid van de methode is
acceptabel en bruikbaar, gezien het verschil in gemiddelde van 0,085 en de
lage standaarddeviatie van 0,23. De herhaalbaarheid van de methode is
acceptabel en bruikbaar, gezien de lage standaarddeviatie van 0,11 en
variatiecoëfficiënt van 0,64. Bij het testen van de robuustheid komt de DoR
iets hoger te liggen naar mate de meetreeks vordert. Echter is dit door de
lage standaarddeviatie verwaarloosbaar. Bij een verdunning van 100 keer
heeft de concentratie invloed op de DoR en word deze niet meer nauwkeurig
en constant gemeten. Bij het 24 uur bewaren van monsters zal de DoR iets
lager komen te liggen. De reproduceerbaarheid van de methode is
acceptabel en bruikbaar, omdat de verschillen in meetresultaten tussen de
analisten minimaal zijn.
Aangeraden word om het verloop van de druk vast te leggen tijdens de
analyse, de kolom en voorkolom voor de optimalisatie te vervangen indien
nodig en proefinjecties te draaien voor het testen van nieuwe methodes.
PAGE 2
, Controleer altijd de maximumtemperatuur van de kolom. Besteed aandacht
aan de samenstelling van het eluens. Als het nodig is om de scheiding te
vertragen, kan het percentage acetaat of natronloog verlaagd worden.
Aanbevolen word de equilibriumstap en spoelstap zo kort mogelijk te maken,
zonder verontreinigen tegen te komen in de chromatogrammen. Voor de
factorbepaling word aangeraden om meer meetresultaten te verzamelen om
de vergelijking sterker en nauwkeuriger te kunnen maken. Voor de
robuustheid moet een lange tijd worden ingesteld tussen de eerste en
laatste injectie om het verloop van de DoR zo goed mogelijk te kunnen
waarnemen. Aangeraden word met hoge concentraties te meten, omdat bij
een lage concentratie de kans op afwijkingen groter is. Als laatste word
aangeraden monsters niet 24 uur of langer buiten de koelkast te houden,
maar monsters opnieuw voor te bewerken en te meten.
Gebruikte afkortingen en begrippen
HPAEC-PAD – Hoge prestatie vloeistofchromatografie, pulserende
amperometrische detectie
HPLC-UV – Hoge druk vloeistofchromatografie, ultraviolet
SOP – Standaard operatie procedure, voorschrift
GC – gaschromatograaf
R&D – Onderzoek en ontwikkeling
THEO – Benaming voor een bepaalde stap binnen het proces tot het maken
van verschillende koffiesoorten. Dit gedeelte word uit een tweede extractie
in kleine hoeveelheden vermengd met koffie uit de eerste extractie.
DoR – Mate van reactie, geeft de lengte van het proces weer
AgCl – Zilverchloride
STDEV – Standaarddeviatie
GEM – Gemiddelde
VC – Variatiecoëfficiënt
QC - Controlemonster
PAGE 3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller marjorie99. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $12.07. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
76462 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now