100% satisfaction guarantee Immediately available after payment Both online and in PDF No strings attached
logo-home
samenvatting hoofdstuk 2 toolbox biotechnologie $4.28   Add to cart

Summary

samenvatting hoofdstuk 2 toolbox biotechnologie

 2 views  0 purchase
  • Course
  • Institution

het 2e hoofdstuk van het gedeelte toolbox samengevat

Preview 1 out of 2  pages

  • November 24, 2021
  • 2
  • 2020/2021
  • Summary
avatar-seller
Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 2
Gelelektroforese
Horizontale elektroforese
 DNA scheiding
 Gel = agarose
 Nancy, Redsafe (vroeger ethidiumbromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA voor visualisatie

Verticale elektroforese
 Eiwitscheiding
 Gel = polyacrylamide
 Coomassie blauw bindt aspecifiek aan EW

Stappenplan: methode en principe
 Aanmaak buffer
 Aanmaak agarose gel
 Laden gel
 Elektroforese
 DNA visualisatie

Aanmaak buffer
 TBE of TAE = heeft 2-voudige beschermende functie
 Bestaat uit:
 Tris (base)
Zorgt ervoor dat pH behouden blijft en beschermd DNA tegen hydrolyse
 Boorzuur of Acetaat (zuur)
 EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) → blokkeert werking van DNase
 Deze buffer word gebruikt voor de aanmaak van de agarose gel

Aanmaak agarose
 Agarose = extract van zeewier
 moleculaire zeef = kleinere molecule DNA zullen sneller doorheen gel bewegen dan grotere
 1g agar (poeder) per 100 ml TBE (buffer) = 1% gel
 Agarosepercentages kunnen variëren van 0.3% agarose tot 4%
 Hoe kleiner het agarosepercentage hoe groter de te scheiden DNA grootte
 Poeder + buffer mengen en opwarmen tot kookpunt, daarna fluorescente dye toevoegen (Nancy)
 Handwarme oplossing uitgieten in mal + slotkam toevoegen die na uitharden verwijdert word

Laden gel
 Gel overbrengen in elektroforese toestel en aanvullen met TBE buffer tot gel volledig onder staat
 DNA stalen pipetteren in de slotjes = laden van de gel
 Laadbuffer/ loading dye word toegevoegd aan het DNA voor 2 redenen:
 Bevat kleurstof: om pipetteerproces en elektroforese makkelijker visueel te volgen
 bevat glycerol: maakt DNA oplossing zwaarder zodat deze makkelijk uitzakt in de slotjes
(densiteit van DNA oplossing wordt verhoogd)

Elektroforese
 40 tot 60 minuten op 70 – 100V
 Elektrisch veld ontstaat: - geladen DNA moleculen kunnen migreren richting positieve electrode
 DNA is negatief geladen en migreert van de kathode (-) naar de anode (+)
 Elektrocutiegevaar
 De afstand van migratie gebeurt in functie van de grootte van de moleculen
 Steeds visueel volgen
 Controle of elektroforese gestart is = vorming van bellen

The benefits of buying summaries with Stuvia:

Guaranteed quality through customer reviews

Guaranteed quality through customer reviews

Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.

Quick and easy check-out

Quick and easy check-out

You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.

Focus on what matters

Focus on what matters

Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!

Frequently asked questions

What do I get when I buy this document?

You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.

Satisfaction guarantee: how does it work?

Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.

Who am I buying these notes from?

Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller fraukevanmeulder. Stuvia facilitates payment to the seller.

Will I be stuck with a subscription?

No, you only buy these notes for $4.28. You're not tied to anything after your purchase.

Can Stuvia be trusted?

4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)

72042 documents were sold in the last 30 days

Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now

Start selling
$4.28
  • (0)
  Add to cart