Summary
samenvatting hoofdstuk 2 toolbox biotechnologie
- Course
- Institution
het 2e hoofdstuk van het gedeelte toolbox samengevat
[Show more]
Seller
Follow
fraukevanmeulder
Content preview
Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 2Gelelektroforese
Horizontale elektroforese
DNA scheiding
Gel = agarose
Nancy, Redsafe (vroeger ethidiumbromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA voor visualisatie
Verticale elektroforese
Eiwitscheiding
Gel = polyacrylamide
Coomassie blauw bindt aspecifiek aan EW
Stappenplan: methode en principe
Aanmaak buffer
Aanmaak agarose gel
Laden gel
Elektroforese
DNA visualisatie
Aanmaak buffer
TBE of TAE = heeft 2-voudige beschermende functie
Bestaat uit:
Tris (base)
Zorgt ervoor dat pH behouden blijft en beschermd DNA tegen hydrolyse
Boorzuur of Acetaat (zuur)
EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) → blokkeert werking van DNase
Deze buffer word gebruikt voor de aanmaak van de agarose gel
Aanmaak agarose
Agarose = extract van zeewier
moleculaire zeef = kleinere molecule DNA zullen sneller doorheen gel bewegen dan grotere
1g agar (poeder) per 100 ml TBE (buffer) = 1% gel
Agarosepercentages kunnen variëren van 0.3% agarose tot 4%
Hoe kleiner het agarosepercentage hoe groter de te scheiden DNA grootte
Poeder + buffer mengen en opwarmen tot kookpunt, daarna fluorescente dye toevoegen (Nancy)
Handwarme oplossing uitgieten in mal + slotkam toevoegen die na uitharden verwijdert word
Laden gel
Gel overbrengen in elektroforese toestel en aanvullen met TBE buffer tot gel volledig onder staat
DNA stalen pipetteren in de slotjes = laden van de gel
Laadbuffer/ loading dye word toegevoegd aan het DNA voor 2 redenen:
Bevat kleurstof: om pipetteerproces en elektroforese makkelijker visueel te volgen
bevat glycerol: maakt DNA oplossing zwaarder zodat deze makkelijk uitzakt in de slotjes
(densiteit van DNA oplossing wordt verhoogd)
Elektroforese
40 tot 60 minuten op 70 – 100V
Elektrisch veld ontstaat: - geladen DNA moleculen kunnen migreren richting positieve electrode
DNA is negatief geladen en migreert van de kathode (-) naar de anode (+)
Elektrocutiegevaar
De afstand van migratie gebeurt in functie van de grootte van de moleculen
Steeds visueel volgen
Controle of elektroforese gestart is = vorming van bellen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller fraukevanmeulder. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.29. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
50064 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now