Summary
samenvatting celmobi: Hoofdstuk 9: DNA-analyse via restrictie en hybridisatie
- Course
- Institution
samenvatting celmobi: Hoofdstuk 9: DNA-analyse via restrictie en hybridisatie
[Show more]
Seller
Follow
ameliakirkov
Content preview
Hoofdstuk 9: DNA-analyse via restrictie enhybridisatie
• Hybridisatie: een enkelstrengig stuk DNA, = probe, basenpaart met een complementair
stukje
Dit kan ook met RNA
→ Scheiding (denaturatie) v/d strengen in vitro met hitte of pH
→ Renaturatie bij lagere pH of temperatuur met toegevoegde probe
Hybridisatie
!!!! De probe is complementair aan de keten die opgespoord moet
worden → fluorescent merken
→ Naar gelang van stringentie (=condities: temp, pH) is de hybridisatie strenger of minder
Streng ⤷ Er is een perfecte match nodig
→ Gebruikt voor SNP-analyse
→ Via dot blot (druppels DNA of nylonmembraan)
→ Met DNA-chip (ASO op drager worden gehybridiseerd met DNA)
→ ASO’s = kunnen verschillende allelen onderscheiden
⤷ Allel-specifieke oligonucleotiden
→ De probe wordt in hoge concentratie toegevoegd => bindt eerst
• Restrictie-enzymen (endonucleases): herkent specifieke DNA-sequentie en knipt het DNA
=> restrictiefragmenten
→ Gelelektroforese: lengte bepalen
→ Herkenningssequenties: 4-6 basenpaarpalyndromen
→ Knipwijze: blunt (stomp) of sticky (overhangende) ends
⤷ ⤷
→ Enzymen vernoemd naar bacterie waaruit afkomstig
→ Pijl naar beneden om knipplaats aan te duiden (↓)
• Gelelektroforese:
▪ DNA: negatief geladen => migreert naar positieve pool
▪ Snelheid afhankelijk van grootte DNA-molecule
→ Agarosegel (100 basenparen – 20 kb)
→ Polyacrylamidegel (10 – 500 bp)
▪ Visualisatie door ethidiumbromide (oranje bij UV)
▪ Lengte van fragmenten door ladder met fragmenten met gekende grootte
• Southern analyse:
→ DNA-restrictiefragmenten gescheiden door gelelektroforese
→ Denaturatie (door pH)
→ Transferatie naar een membraan
→ Incubatie hybridisatiebuffer met gedenatureerde probe
→ Gebonden probe gevisualiseerd
• RFLP-analyse: Restrictie Fragment Lengte Polymorfisme
→ Verschil in lengte van restrictiefragmenten door verschil in DNA-sequentie
En zijn verschillende lengtes van restrictiefragmenten
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller ameliakirkov. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $5.90. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
52510 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now