Class notes
Notes de cours Biologie cellulaire
- Course
- Institution
Théorie du signal et RE
[Show more]
Seller
Follow
Ori2002
Content preview
Cours n°3 Biologie CellulaireThéorie du signal et Ré2culum Endoplasmique
TOUTES les protéines codées par le génome nucléaire commencent leur synthèse dans le cytosol.
Certaines protéines terminent leur synthèse dans le ré2culum endoplasmique.
Le RE occupe tout le volume cellulaire. La membrane externe est con=nue avec la membrane qui délimite le RE.
Où sont synthé2sées les protéines d’une cellule sécrétrice ?
Approche expérimentale : Pulse-Chase (ou marquage métabolique)
Georges PALADE a eu un prix Nobel en 1974.
Il a réalisé un pulse-chase sur des cellules de pancréas exocrine, autoradiographie, MET.
Les protéines en cours de synthèse deviennent radioac2ves. On effectue des lavages pour enlever la leucine
radioac2ve.
Ce qui nous intéresse c’est où sont fabriquées les protéines, dans le cytosol ou le RE ?
On met ensuite la tranche de pancréas sur une lamelle afin d’observer en MOT. On va ensuite observer où les grains
d’argents ce sont formés.
On observe que les grains d’agent (noirs) sont associées au ré2culum endoplasmique rugueux.
Les protéines sont donc généralement formées au niveau du RER.
I. Un signal de ciblage vers le RE a été iden2fié
Existe-t-il un contrôle du ciblage des protéines au RE ?
Approche expérimentale : Recons9tu9on in vitro du transport, vers le RE, des protéines en cours de traduc9on
G. Blodel a eu un prix Nobel en 1999
1. Lyse mécanique des cellules par la technique du PoRer
Il y a d’autres techniques comme :
- Ultra-sons
- Lyse hypotonique
- Passage par un trou d’aiguille
- Bombe à cavita=on (pression)
Page 1
, Cours n°3 Biologie Cellulaire
Les cellules ne passent pas en en=er, elles sont é=rées et se cassent. On se retrouve alors avec un homogénat.
2. Centrifuga2ons différen2elles
—> voir fiche techniques moodle
On fait une première centrifuga=on ou on récupère le noyau, les organites sont présents dans le surnageant. On
prend le surnageant et on recommence jusqu’à obtenir un culot.
Avec ceSe technique on arrivera pas à séparer les microsomes, pour cela on u=lisera un gradient de densité.
3. Centrifuga2on sur gradient de densité (de saccharose)
—> voir fiche techniques moodle
On va déposer un homogénat ou un surnageant. Il va y avoir une sépara=on des organites selon leur densité.
4. Traduc2on in vitro avec ou sans microsomes
Avec un premier gradient de densité il va purifier les microsomes et avec un second gradient il va séparer les
microsomes.
Il réalise ensuite une traduc=on in vitro, il y a 2 condi=ons expérimentale :
- En absence de microsomes
- En présence de microsomes
5. Résultats
La présence des microsomes induit une coupure de la protéine.
Les protéines les plus pe=tes vont migrer plus loin dans le gel.
La protéine tronquée est-elle à l’intérieur ou à l’extérieur du microsome ?
—> diapo 11
Le test de protec2on à la protéase consiste à ajouter une protéase qui va dégrader les protéine accessible (verte et
orange). La protéine verte va être dégradée en=èrement, la protéine sera par=ellement tronquée donc elle va migrer
plus haut, elle a un coté transmembranaire.
Grace à un détergent la protéase va avoir accès à l’intérieur de la cellule. Donc tout ce qu’il y a à l’intérieur de la
cellule va être dégradé.
Donc la protéine tronquée est à l’intérieur du microsomes.
Page 2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller Ori2002. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.65. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
60904 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now