Samenvatting hoorcolleges Eiwitten en Enzymen (Moleculen deel 1)
8 views 0 purchase
Course
Moleculen (BMW10505)
Institution
Universiteit Utrecht (UU)
In dit document zijn alle hoorcolleges van het subonderdeel Eiwitten en Enzymen samengevat. Dit onderwerp komt aan bod in het eerste deel van de cursus Moleculen.
Moleculen
Deel A – Organische chemie en eiwitten en enzymen
Eiwitten en enzymen
Inhoudsopgave
HC 1&2 Analyse technieken.................................................................................................................................2
HC 3 & 4 Thermodynamica, structuur & katalyse................................................................................................5
HC 5 & 6 Enzymkinetiek & regulatie....................................................................................................................7
HC 7 & 8 Eiwitstructuur en eiwitfunctie.............................................................................................................10
, HC 1&2 Analyse technieken
Eiwitten maken het waar, terwijl genen beloven alleen iets. Het genoom is in iedere cel
gelijk, maar het proteoom (alle eiwitten) zijn in iedere cel anders. Daarnaast zijn er ook veel
meer verschillende eiwitten dan genen.
Proteoom = alle eiwiten in de cel/organisme aanwezig zijn. Mensen hebben ong 23.000
genen maar hebben zo’n 47.000 eiwitten. Het humane proteoom is dus 47.000 eiwitten
groot, gebaseerd op primaire structuur. Daarnaast kunnen de eiwitten ook post-
translationele modificaties krijgen. Ze denken dat dit zorgt voor nog veel meer eiwitten.
Hoe onderzoek je eiwitten?
- Analytisch (bekijken). Dit kan op 2 manieren; kwalitatief (is het eiwit aanwezig?) en
kwantitatief (hoeveel eiwit?).
- Preparatief (hebben). Je gaat hierbij actief het eiwit opzuiveren uit een
cel/weefsel/organisme.
Welke aspecten karakteristeren een eiwit
Aminozuurvolgorde, 3D structuur, molecuulgewicht, activiteit, wanneer en waar in de cel,
aan welke eiwitten bindt het, wat gebeurt er als ik het verander of uitschakel, wat gebeurt er
bij overexpressie.
ANALYTISCH
Gel-elektroforese
De gel = polyacrylamide. Deze vormen lange keten met crosslinks. Je scheidt je eiwitten op
lading en vorm/grootte.
SDS-PAGE
Bevat SDS (sodium dodecylsulfaat). Dit denatureert het eiwit en maakt de eiwitten uniform
negatief. 1 SDS molecuul per 2 aminozuren. Je lading per massa is dus ongeveer evenveel
voor ieder eiwit. Je scheidt dus nu alleen op grootte. Er kan nog een stofje toegevoegd
worden (mercaptoethanol of DTT) om zwavelbruggen te reduceren. Je kan de poriegrootte
aan passen om zo de gewenste scheiding te krijgen. Een gradient gel heeft een laag
percentage onderin en een hoog percentage bovenin. Een molecuulmarker is een eiwit
waarvan je de massa al weet.
IEF (Iso-Electric focussing)
Polyacrylamide gel met pH-gradient. Links lage pH, rechts hoge pH. Eiwitten hebben allemaal
een iso-electrisch punt = het punt waar de netto-lading van een eiwit 0 is.
2D elektroforese
Eerste dimensie iso-electric focussing en tweede dimensie SDS-page. Andersom zou niet
werken want dan hebben ze allemaal dezelfde lading.
PREPARATIEF
Je kan scheiden op grootte, oplosbaarheid, lading, bindingsaffiniteit. Het doel is om een zo
hoog mogelijke activiteit te krijgen, in een oplossing met zo min mogelijk verschillende
eiwitten.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller ivyankone. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.89. You're not tied to anything after your purchase.
