1 Identificatiemethoden
2 Primaire kenmerken
3 Morfologische kenmerken
→ vorm, grootte, liging, aanwezigheid insluitsels, korrels…
→ Gramkleuring: Grampositief / Gramnegatief / Gramlabiel (deels ontkleurt)
→ Ziehl-Neelsen-kleuring: zuurvast / niet-zuurvast / zwak-zuurvast
4 Groeivoorwaarden
5 Omgevingsatmosfeer
- Strikt aëroob = alleen in aanwezigheid van zuurstof
- Strikt anaëroob = alleen in afwezigheid van zuurstof
- Facultatief = onder beide omstandigheden (meeste)
- Micro-aerofielen = onder verminderde zuurstofspanning
- Capnofielen = zuurstof nodig en verhoogde CO2-spanning
6 Temperatuurtolerantie
→ meeste groeien op 36°C
→ wordt secundair getest
7 Zouttoleratie en -dependentie
→ Halofiel = hoge zoutconcentratie nodig (3% NaCl)
→ secundair getest door selectieve voedingsbodems zoals MSA
8 Galtolerantie en galstimulatie
Micro-organismen = commensalen in darm → moeten overleven in aanwezigheid
van gal en galzouten → in selectieve bodem voor enterobacteriën en enterokokken
9 Gevoeligheid voor schemische stoffen en antibiotica
→ differentieel kenmerk voor bepaalde species
→ AB zoals novobiocine (niet-therapeutisch aangewend), penicilline (wel
therapeutisch)
→ als schijfjes filtreerpapier of tablet
10 Pigmentproductie
→ afhankelijk van samenstelling bodem en blootstelling licht
11 Hemolyse
1 ∝- en ß-hemolyse
→ ∝-hemolyse = onvolledige hemolyse + vorming geoxideerde afbraakproducten
(groen)
→ ß-hemolyse = volledige hemolyse van RBC + heldere opklaringszone rond
kolonie
→ γ-hemolyse = geen hemolyse
→ beide afhankelijk van soort bloed in bloedagar
2 CAMP-test
→ identificatie van Streptococcus agalactiae
→ 2 hemolysines versterken elkaars werking
→ bloedplaat met schapenbloed
→ S. aureus en S. agalactiae = ß-hemolytisch
→ versterkte hemolyse door interactie van ß-toxine (stafylokok) en
diffundeerbare factor (streptokok)
, 3 Omgekeerde CAMP-test
→ identificatie Clostridium perfringens
→ CAMP-factor van streptokok en ∝-toxine van C. perfringens → versterkte ß-
hemolyse
4 Snelle enzymatische reacties
→ kan met primair gegroeide kolonies op een isolatiebodem (vb TSA)
1 Katalase-test
→ katalase = enzym dat H2O2 splitst en O2 vrijmaakt (schuimvorming)
→ bij meeste aërobe en facultatief anaërobe bacteriën behalve streptokokken,
enterokokken en G+-bacillen
→ onderscheid maken tussen Grampositieve genera
TEST: H2O2 3 % is verdunning van 1 op 10 (uit 30 %)
→ directe methode: H2O2 3 % op kolonies vaste bodem → positief = onmiddellijk
gasbelletjes
(kan ook op bouillon → positief =
schuimvorming)
→ slide-test (referentiemethode): gegroeide kolonie aangeprikt met entnaald en op zuiver
objectglaasje → met pasteurpipet een druppel H2O2 3 % NIET MENGEN
→ positief = onmiddellijk gasbelletjes
2 Cytochroomoxidasetest
→ cytochroomoxidase = ademhalingsenzym, alleen bij aërobe bacteriën aanwezig
, → brengt O2 in cellen voor metabolische processen via oxidatie
→ TEST: dimethyl-para-fenyleendiamine of tertramethyl-para-fenyleendiamine
dihydrochloride (gevoeliger, maar dagelijks verversen)
→ directe methode: druppels op kolonies → positief = roze → blauwpaars →
paarszwart
→ methode op filtreerpapier: teststrookje met ingedroogd reagens, met plastic
entnaald kolonies opbrengen, na enkele minuten aflezen → positief = roze-
grijsblauwe verkleuring
3 Aminopeptidasetest
→ L-alanine-aminopeptidase = enzym in celmembraan van alle G—bacillen
→ splitst L-alanine af van substrate,
→ nuttig als Gramkleuring onduidelijk was
→ TEST: met entoog kolonie opnemen en in FO in suspensie brengen, tststrook
met reagens in buisje en dan in WWB (37 °C) (min 10 min, max 30 min)
→ positief = geel = alle Gramnegatieve
→ negatief = kleurloos = alle Grampositieve
4 Secundaire kenmerken
→ biochemische reacties
→ voor verdere identificatie
1 Afbraak van koolhydraten
→ 3 groepen: - monosachariden
- polysachariden (polymeer van monosachariden)
→ disachariden: sacharose (SAC), lactose (LAC), mannose, …
- polyalcoholen (reductieproduct monosachariden)
→ arabitol, mannitol (MAN), inositol (INO), glycerol, …
→ monosacharide: arabinose (ARA), rhamnose (RHA)
→ polysachariden zijn te groot om cel binnen te gaan → eerst afbreken tot mono-
of disacaride via enzymen
→ aërobe omstandigheden → oxidatie
→ anaërobe omstandigheden → fermentatie
Polysacharide → glucose → pyrodruivenzuur (ALTIJD !) (CH3-CO-COOH)
→ altijd minstens 1 zuur gevormd: verbruik suiker opsporen via kleurverandering
door pH-indicator
1 Vergisting van koolhydraten
Principe: vergisting wordt nagegaan in suikervrije basisbodem met finale
concentratie 1% en een geschike pH-indicator (vb Purple Broth)
- In bouillon: 10 % suikeroplossing gesteriliseerd en asyptisch toevoegen zodat
eindconcentratie 1 % is, soms met Durhambuisjes (heel oslachtig)
Uitvoering: met entoog een reincultuur opnemen en incuberen (36 °C)
Aflezing: elke dag controleren (maximum 7 dagen)
→ Positief = gele kleuromslag = suiker wordt verbruikt
→ Negatief = blijft paars = suiker wordt niet verbruikt
- In halfvaste bodem: zoals in bouillon, pH-indicator = fenolrood
Uitvoering: met entoog (om gasbelletjes te vermijden)
Aflezing: zoals in bouillon
2 Oxidatie-fermentatie-test (OF)
Principe: kijken als suiker oxidatief of fermentatief of niet gemetaboliseerd wordt
Omstandigheden creeëren waarbij bovenaan aëroob is en onderaan
anaëroobaëroob
Uitvoering: halfvaste bodem + glucose (of een ander suiker), in WWB (koken)
Enting: steekening, incubatie 36 °C
Aflezing: dagelijks bekijken over 10 dagen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller BLTstudent. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.77. You're not tied to anything after your purchase.