Summary
Metabolieten en lipiden samenvatting
- Course
- Institution
In dit hoofdstuk worden de methoden voor metabolieten en lipiden bepalingen beschreven. Hoe deze onderscheiden kunnen worden met verschillende methoden
[Show more]
Seller
Follow
saravanhecke23
Reviews received
Content preview
METHODEN: METABOLIETEN EN LIPIDENMetaboliet = elk organisch molecule in het lichaam met een MW < 1500 Da = peptiden,
oligonucleotiden, suikersn nucleosiden, organische zuren, ketonen, aldehyden, amines, AZ, lipiden,
steroïden, xenobiotica stoffen die van buiten af komen). Dit zijn >200 000 verschillende moleculen.
Σ = metaboloom.
Metabolieten hebben verschilolende belangrijke functies:
- Bouwstoffen voor macromoelculen
- Brandstof voor energievoorziening
- Signaaltransductie
Belangrijk voor communicatie:
- Metabolisme interageert alle niveaus van cellualire regulatie + omgevingsfactoren →
metaboloom is read-out van functioneren van een cel/organisme
- Verandering/verschil in metaboloom wordt geassocieerd met vele complexe aandoeningen:
kanker, obesitas, diabetes…
o Metabolic signatures van ziektetoestanden → diagnose
o Interventie mogelijk via dieet
o Snelle analyse van therapierespons
Probleem → heel erg heterogene groep van moleculen!!!
Specifieke testen van individuele metabolieten
= traditionele metabolietenanalyse. Vereist vaak specifieke opzuivering, optimalisering van
scheidingscondities, soms arbeidsintensief. Voorbeelden: RIA, HPLC, GC, CE, MS.
Vaak gaat men een enzymatische reactie koppelen aan een kleurreactie. Voorbeeld bij diabetes met
een glucose test.
Metabolomics
Metabolomics = alles omvattende en simultane analyse van
metabolieten in een biologisch systeem. Om zo veel mogelijk van
die metaboliten tegelijk te bestuderen → inviezen of wassen met
een koude vloeistof → quencing: zo gaan de metabole reacteis
stilgelegd worden. vorm van extractie met ethanol zodat de
eiwitten precipiteren. De vetoplosbare metabolieten met
chloroform.
Metabobomics = kwantitiatieve analyse van een metabole respons op een stimulus.
1
, NMR-spectroscopie MS
Gebasseerd op chemical shift van chemische Gebasseerd op massa en lading van moleculen
structuren na radiogolf-excitatie in sterk MS/MS (fragmentatie) of Orbitrap (hoge massa
magnetisch veld resolutie)
Kwantitatief (geen onderlinge interferentie Minder kwantitatief (verschil ionisatie,
interferentie) wel vergelijking tussen stalen
Geen scheiding nodig Scheiding vooraf via GC, HPLC, CE…
Niet erg gevoelig (alleen abundante Heel erg gevoelig (minder abundante
metabolieten +- 300) metabolieten >3000)
Targeted of untargeted (identificatie probleem)
Via NMR
Protonen zijn kleine magenten met 2 mogelijke oriëntiaties. (spin up of down). Deze kunnen
switchen door een radio-golf op de protonen te brengen. Welke energie of welke golflengte nodig is
hangt af van de elekrtonenconfiguratie rond de kern. De golflengte ga je meten en dat zegt dan iets
over de afscherming van de kern door de elektronen en dus ook over de structuur van het atoom.
Dit is kwantiatief, geen scheiding nodig. Veel materiaal nodig want niet echt gevoelig, enkel de
meest abundante metabolieten kunnen zo bekeken worden. Zoals men hier kan zien: 3 chemische
shifts ten opzichte van TMS. Sterkte van magneten zijn verschillend in labo’s → daarom TMS als 0.
De verschillen in golflengte is in MHz (parts per million).
Weinig voorbereiding nodig – typisch 200-tal abundante moleculen.
Via MS
Vaak fragmentatie of een toestel met hele grote massa resolutie. Moleculen en ionen gaan cirkels
dragen. Radio-golven rond draaien → fourier transformatie om zo de massa te kunnen bepalen. Heel
goevoelig. Hiermee kan men dus naar veel minder abundante moleculen kijken. Men kan naar
1000den moelculen kijken. Minder kwantitatief doordat de ionisatie van het ene molecule invloed
heeft op dat van andere.
Ingewikkelder dan NMR. Staal – quencing. De metabole paden moeten stilgelegd worden.
Untargetted: men wilt zo veel mogelijk meten en bekijken → ontdekken welke stoffen er zijn.
Targetted enkel naar bepaalde moleculen kijken en op een zo kwantitatief mogelijke manier
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller saravanhecke23. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.24. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
75057 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now