El microscopio electrónico se utiliza cuando queremos observar estructuras que están por debajo del
poder de resolución del microscopio óptico (ultraestructuras). El gran poder de resolución del M.E. se
consigue gracias a que no se hace servir la radiación electromagnética de la luz visible, sino que se
utiliza la alta frecuencia de un haz de electrónes que incide sobre la muestra.
- La fuente es un conjunto de electrones que atraviesan la muestra (NO es una bombeta ni un láser).
En la parte de arriba hay un cañon de e- (filamento de tunsteno que se puede calentar y que emite los
e-). Estos serán impulsados a través de un tubo en el cual se ha hecho el vacío y donde se encuentra la
muestra. Esta será atravesado por los e- que lllegan a una placa fotogràfica, la cual permitirá ver la
imágen en la pantalla de un monitor. Un detector captarà fotografías con e- de las imágenes que lleguen
al monitor.
La imágen puede ser que tenga una región que retenga los e- y otra que los deje pasarsólo pasan los
e- que se han enfocado y eso hace que se observe un contraste (blanco y negro).
La muestra se coloca sobre una rejilla de cobre de 3mm de diámetro
(soporte); si fuese de vidrio, los e- se quedarían en él.
Aquest microscopi consta de diferents lents electromagnètiques:
-Lent objectiu: és la principal ja que és imprescindible per enfocar
els e-que van pel centre de la mostra estructura de la
QUALITAT de la imatge).
-Lent projector: augmenta/ampliala imatge fins a 200.000
augments.
-Lent condensador: concentra/condensa els e- sobre la mostra.
Per saber quina resolució té el microscopi electrònic apliquem la fórmula (tema anterior). Com més
petita sigui la distància (D), millor resolució tindrà.
-La longitud d’ona depèn dels e- (es calcula amb la fórmula següent).
ƛe = 0,1
√150
-Si augmentem el voltatge, tindrem millor resolució. v
-Si augmentem 100 vegades la capacitat del sistema, tindrem 1000 augments.
Hi ha dos tipus principals de microscopi electrònic: de transmissió i de rastreig.
1.1. Preparació de la mostra
Para poder analizar la muestra en el microscopio electrónico, ya sea de transmisión o de rastreo, la
tenemos que tratar para que sea fina y para que se mantengan las estructuras siguiendo los siguientes
pasoss:
1. Fijación: fijar la muestra con glutaraldehído (para mantener la estructura de las proteínas y de los
ácidos nucléicos) y con tetraóxido de osmio (para mantener las membranas de los lípidos)
2. Desidratación: utilizar alcoholes y acetonas, es decir, sustituir el agua por componentes no volátiles.
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