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Tema 2: Microscopia electrónica
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Apuntes realizados a partir de las clases magistrales, presentaciones y bibliografía.
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Biologia cel·lularTEMA 2 - MICROSCÒPIA ELECTRÒNICA
El microscopio electrónico se utiliza cuando queremos observar estructuras que están por debajo del
poder de resolución del microscopio óptico (ultraestructuras). El gran poder de resolución del M.E. se
consigue gracias a que no se hace servir la radiación electromagnética de la luz visible, sino que se
utiliza la alta frecuencia de un haz de electrónes que incide sobre la muestra.
- La fuente es un conjunto de electrones que atraviesan la muestra (NO es una bombeta ni un láser).
En la parte de arriba hay un cañon de e- (filamento de tunsteno que se puede calentar y que emite los
e-). Estos serán impulsados a través de un tubo en el cual se ha hecho el vacío y donde se encuentra la
muestra. Esta será atravesado por los e- que lllegan a una placa fotogràfica, la cual permitirá ver la
imágen en la pantalla de un monitor. Un detector captarà fotografías con e- de las imágenes que lleguen
al monitor.
La imágen puede ser que tenga una región que retenga los e- y otra que los deje pasarsólo pasan los
e- que se han enfocado y eso hace que se observe un contraste (blanco y negro).
La muestra se coloca sobre una rejilla de cobre de 3mm de diámetro
(soporte); si fuese de vidrio, los e- se quedarían en él.
Aquest microscopi consta de diferents lents electromagnètiques:
-Lent objectiu: és la principal ja que és imprescindible per enfocar
els e-que van pel centre de la mostra estructura de la
QUALITAT de la imatge).
-Lent projector: augmenta/ampliala imatge fins a 200.000
augments.
-Lent condensador: concentra/condensa els e- sobre la mostra.
Per saber quina resolució té el microscopi electrònic apliquem la fórmula (tema anterior). Com més
petita sigui la distància (D), millor resolució tindrà.
-La longitud d’ona depèn dels e- (es calcula amb la fórmula següent).
ƛe = 0,1
√150
-Si augmentem el voltatge, tindrem millor resolució. v
-Si augmentem 100 vegades la capacitat del sistema, tindrem 1000 augments.
Hi ha dos tipus principals de microscopi electrònic: de transmissió i de rastreig.
1.1. Preparació de la mostra
Para poder analizar la muestra en el microscopio electrónico, ya sea de transmisión o de rastreo, la
tenemos que tratar para que sea fina y para que se mantengan las estructuras siguiendo los siguientes
pasoss:
1. Fijación: fijar la muestra con glutaraldehído (para mantener la estructura de las proteínas y de los
ácidos nucléicos) y con tetraóxido de osmio (para mantener las membranas de los lípidos)
2. Desidratación: utilizar alcoholes y acetonas, es decir, sustituir el agua por componentes no volátiles.
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