Summary
VOLLEDIGE Samenvatting Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
- Course
- Institution
Alle hoofdstukken van het volledige jaarvak samengevat, alles staat erin Ik had met deze samenvatting 18/20
[Show more]
Seller
Follow
paulinebal
Reviews received
Content preview
Methoden allesHoofddoelen verschillende technieken
Celculturen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Primaire-, geïmmoraliseerde-, kanker-, stamcelcultuur
Methode (staalbereiding):
1) fysiologische vloeistof afnemen 2)cellen van interesse selecteren 3)in cultuur brengen
4) invriezen (cryopreservatie) of verder mee werken (in incubator)
Weefselculturen
Functie: studiemateriaal
Methode (staalbereiding): 1) staalname 2)bewaren via fixatie (op kamerT) of invriezen
Modelorganismen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Gist, worm, vlieg, zebravis, kikker, muis
Centrifugatie
Functie: scheiden deeltjes
Bv.: isolatie van plasma, PBMC, serum, organellen of celfractioneringen
Methode scheiding:
- Sedimentatie dmv Fz
→op grootte, densiteit, vorm
- Klassieke: afdraaien => pellet
- Differentiële: afdraaien met ≠G-force => isolatie organellen (≠zuiver)
- Densiteitsgradient: Zonale: staal op gemaakte gradient en afdraaien
→ op grootte en massa
Isopycnische: mengen gradient en staal + afdraaien
→ op densiteit
Methode afdraaien: via rotor (vaste hoek, swinging bucket, verticale)
→ lage vs hoge vs ultrasnelheid (analytische en preparatieve)
FACS en MACS
Functie: celsortering van levende cellen
Bv.: single-cell (FACS)
Methode: FACS: fluoresc. antistof tegen cellen van interesse: laser => lading => scheiding (electrode)
MACS: magnetische antistof: magnetisch veld in kolom => gemerkte uit suspensie
LCM
Functie: celsortering bij weefsels => levende cellen selecteren
Methode: IR-laser => film klevering => plakt aan weefsel
UV-laser => deel weefsel in tube catapulteren
,Immunodetectie
Functie: visualiseren/ selecteren cel van interesse
Methode:
! vals positieve (selectiviteit) vs vals negatieven (sensitiviteit)
Lichtmicroscopie
Functie: lichtbron door structuur sturen
=> vergroten met voldoende resolutie en contrast (contrast door het licht)
Methode:
- Kohlerbelichting: condensor lens positioneren zodat velddiafragma (beeldvlak) scherp
=> parallelle lichtbundel door preparaat => homogene belichting
- Contrasttechnieken:
▪ Klaarvleld: kleuring => contrast
▪ Donkerveld: strooilicht opvangen => contrast
▪ Fasecontrast: interferentie verstrooide en directe licht => contrast
▪ DIC en polarisatiecontrast: interferentie 2 ⊥ gepolaris. lichtbundels => contrast
Bioluminescentie
Functie: lichtemissie => meten mechanismes gekoppeld met genexpressie (en post-TXN-regulatie)
=> meten celviabiliteit (cytotoxiciteit), kinaseactiviteit, contaminatie
=> in vivo: snelle detectie tumor (meet via CCD)
Methode: luciferine, luciferase, O2, ATP → oxyluciferine + lichtemissie
Fluorescentie
Functie: via fluorescente kleurstof: detectie target mole (kan via immunofluorescentie)
via fluorescent proteïne: meten en lokalisatie genexpressie of activiteit promotor
in vivo
Methode: lichtabsorptie door fluorofoor => lichtemissie
1. FLIM
Levensduur aangeslagen toestand fluorofoor bepalen => OZ omgevingsfactoren
- Fluoroforen scheiden → meet hoe snel fluorescent signaal verzwakt
2. FRAP en FLIP
Meten diffusiesnelheid en mobiliteit in cel
- Bleaching regio => meet hoe snel signaal herstelt vs volledig verloren gaat
3. FRET
OZ moleculaire interacties inter- of intracellulair
- Overlap emissiespectrum donor - excitatie acceptor => E transfer => shift spectrum (E daalt)
Fluorescente microscopie
Functie: vergroten + contrast doordat structuur zelf licht uitzend
Methode: lichtbron => exciteren fluorescente moleculen => terugval grondtoestand => beeldvorming
Epi- vs confocale- vs 2-foton fluorescentiemicroscopie (van dun → dikke preparaten)
, UV/Vis spectroscopie
Functie: Kwalitatieve en kwantitatieve (concentratie) analyse eiwitten, DNA, …
Zuiverheid DNA
Methode: bindingselectronen absorberen fotonen => I licht daalt => I meten met PMT => A = ∆I
Spectrofluorimetrie
Functie: FACS, sanger sequencing, concentratie DNA bepalen, meten FRAP, FRET, FLIP, FLIM
Methode: licht: exciteert fluorofoor → terug naar grondtoestand: emissie licht → I meten met PMT
IR-spectroscopie
Functie: Kwalitatieve analyse (fingerprint): geeft vibraties (obv absorptie) van een mole weer
=> geeft polaire karakter binding weer
Methode: mole absorbeert fotonen => vibratie: geeft warmte E af aan omgeving => I licht daalt
=> meten verandering E (vibratieniveau) met IR detector
Raman scattering
Functie: geeft vibraties (obv verstrooiing) van een mole weer
=> geeft covalente karakter binding
Methode: laser (hoge I): E van licht => mole naar virtueel aangeslagen toestand: vervorming e- wolk
=> E verandert => meet verandering E (vibratieniveau) in verstrooide licht
NMR
Functie: structuuranalyse,
Methode: molecule in magnetisch veld: RF puls met juiste Lamorfrequentie van de H-kernen
=> verandering magnetisatie => meten relaxatie
Massaspectroscopie
Functie: scheiden + analyse deeltjes op m/z ratio
via harde ionisatie: kwalitatieve analyse (fragmentatie in functionele groepen)
via zachte ionisatie: kwantitatieve analyse + geeft MW van mole
Methode: ionenbron: laden moles → massa analyser: scheiden → detector: meten intensiteit
via continue dynode e- multiplier (hoornshape) of microchannelplate
Kolomchromatografie
Functie: scheiden stoffen + opvangen
Methode: op molecuulgrootte, affiniteit, adsorptie of lading
HPLC normaal (trager, minder R, grotere V) vs UPLC (korter, meer R)
→ evaporative light scattering of UV/Vis detector
GC met gepakte kolom (grote V, weinig R, lang) of capillaire (klein V, korter, gevoeliger)
→ TCD of FID
Combi massaspectroscopie en kolomchromatografie
- HPLC gecombineerd met ESI
- GC gecombineerd met CI of EI
Scheiding componenten mengsel via chromatografie
Massa analyse van de componenten met MS (bepalen structuur afzonderlijke componenten)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller paulinebal. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $14.10. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
79373 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now
Recently viewed by you
