Summary
Samenvatting BCM21 Week 4
- Course
- Institution
Samenvatting BCM21 Week 4
[Show more]
Seller
Follow
Cristy123
Reviews received
Content preview
BCM21 Week 4Cristy Verzijl
Enzymkinetiek
Enzymactiviteit
Als maat voor de activiteit van enzymen wordt de snelheid genomen van de
enzymreactie
Enzymactiviteit kan worden uitgedrukt als:
Hoeveelheid substraat die wordt gebruikt per tijdseenheid (vb. nmol/min)
Hoeveelheid enzym in staat om1 μmol substraat per minuut om te zetten bij 25oC
hoeveelheid enzym in staat om1 mol substraat om te zetten per seconde(U of IU,
een niet SIeenheid)
o SI: Système International d’Unités: het internationaal geratificeerde meter‐
kilogram‐seconde systeem voor metingen (wetenschappelijke overeenkomst)
(katal of kat, een SI eenheid), 1 kat = 6 x 107 IU, daarom wordt vaak gebruik
gemaakt van nkat of pkat
Specifieke activiteit (SA) van een enzym
De specifieke activiteit is de activiteit gedefinieerd als het aantal eenheden per mg eiwit
(IU/mg eiwit of katal/kg eiwit)
Spectrofotometische analyse
Reactie A+B↔C+D
Voor bepaling van de enzymactiviteit moet gezocht worden naar een methode om de
verandering van de concentratie van A, B, C of D te kunnen meten in de tijd in
aanwezigheid van een bepaalde hoeveelheid enzym.
Vaak wordt hierbij gebruikt gemaakt van een spectrofotometrische methodeVele
substraten en producten absorberen zichtbaarlicht of UV licht
In de andere gevallen kan gebruik worden gemaakt van een colorimetrische
(kleur) chemische reactie
De verandering in absorbantie bij een bepaalde golflengte als gevolg van de verandering
van de concentratie van de te meten stof kan spectrofotometrisch worden gemeten.
Bepaling van enzymactiviteit
Verscheidene assays zijn gebaseerd op de omzetting van de coenzymen:
NAD+ NADH NADP+ NADPH
Geoxideerde vorm Gereduceerde vorm
Er zijn in principe 2 manieren om de enzymactiviteit te bepalen:
1. Via een continu gemeten reactiesnelheid (direct of indirect)
2. Via een discontinu gemeten reactiesnelheid
1. Via een continu gemeten reactiesnelheid (direct of indirect)
Malaatdehydrogenase (MDH). Voorbeeld van een direct en continu gemeten
reactiesnelheid
malaatdehydrogenase
L-malaat + NAD+ ↔ oxaalacetaat + NADH + H+
Pyruvaatkinase (PK). Voorbeeld van een indirect en continu gemeten reactiesnelheid
Pyruvaatkinase
PEP + ADP ↔ pyruvaat + ATP
Lactaatdehydrogenase
pyruvaat + NADH + H+ ↔ L-lactaat + NAD+
4
, 2. Via een discontinu gemeten reactiesnelheid
Discontinu gemeten reactiesnelheid: De enzymatische reactie wordt na een bepaalde tijd
beëindigd, waarna het reactiemengsel geanalyseerd wordt.
α‐amylase (αA). Voorbeeld van een discontinu gemeten reactiesnelheid
αAmylase
(glucose)n ↔ (glucose)n-1 + D-glucose + H2O
C6H12O6 + 2Cu2+ + 4 OH- → C6H12O7 + Cu2O + 2 H2O
glucose blauw rood
Reducerende suikers, zijn suikers (mono‐ en disacchariden), die een redoxreactie kunnen
aangaan met oxidatoren. Voorbeelden hiervan zijn alle monosacchariden (bijv. glucose,
fructose en galactose) en de disacchariden: lactose en maltose.
Bepaling Enzymactiviteit: kunstmatige substraten
Indien de natuurlijke substraten voor een enzymmatische reactie
spectrofotometrischniettemetenzijndankangebruikgemaaktwordenvakunstmatige
substraten: n
Chromogene substraten: leveren een gekleurd product
Fluorogene substraten: leveren een fluorescerend product
Principe Kunstmatige substraten zijn opgebouwd uit een kernmolecuul
(fluorescerend of gekleurd) gekoppeld aan een andere groep d.m.v. een covalente
band.
Door deze koppeling is het fluorescerende signaal van het kernmolecuul
verlaagd of verandert het gekleurde kernmolecuul in een ongekleurd
kernmolecuul.
Zodra het enzym de covalente band splitst komt het kernmolecuul vrij en
geeft fluorescentie of een gekleurdproduct.
Kunstmatige substraten
Chromogene kernmoleculen (chromoforen)
Nitrofenolen (vb. ortho‐nitrofenyl (ONP))
Nitroanilines
Derivaten van alizarine (vb. TMB)
Indoxylsubstraten (vb. X‐Gluc (5‐bromo‐4‐chloro‐3‐indolyl‐ß‐D‐glucuronide))
Fluorogene kernmoleculen (fluoroforen)
Coumarine derivaten (vb. 4‐methylumbelliferon (MU))
Fluorescein
Bepaling van enzymactiviteit
De wet van Lambert-Beer
A=Ɛ∙l∙c ΔA/Δt = Ɛ ∙ l ∙ Δc/Δt
A = extinctie (‐) = ‐ log (It / I0)
ε = extinctiecoëfficiënt (mL / (mmol∙cm)
l = optische weglengte van de cuvet (cm)
c = concentratie van de absorberende stof (mmol/mL)
4
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller Cristy123. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.23. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67474 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now