Summary
Samenvatting Basis Eiwitzuivering en analyses
- Course
- Institution
Document is een samenvatting van het vak eiwitzuivering en analyses waarbij basistechnieken zoals kolom chromatografie en elektroforese aan bod komen
[Show more]
Seller
Followdaphnevandijk
Reviews received
Content preview
Samenvatting eiwitzuivering en analyseBron met eiwit → homogeniseren + stabiliseren → centrifugeren + filteren → zuiveren → analyseren
Adsorptie → heterogenen reactie waarbij verontreinigde
componenten gebonden worden aan absorbent, ook wel
kolom.
Absorptie → vasthouden van iets, opnemen
Gezuiverde eiwitten kunnen gebruikt worden voor:
- Studeren van enzymatische functies en regulering
- Onderzoeken van eiwit interacties
- Produceren van antistoffen
- 3D structuren
- Productie van agentia en enzymen
Basis technieken
Er zijn 20 verschillende aminozuren die overal terug te vinden zijn alleen met een andere
aminozuurvolgorde. Aminozuren bestaan uit een aminogroep, een carbon groep en ze hebben een
restgroep. De restgroep is vaak belangrijk voor het scheiden op eigenschappen.
Eigenschap Methode Wat houdt het in
Oplosbaarheid Precipitatie met ammoniumsulfaat Fysisch-chemisch proces waarbij er
gekeken wordt naar neerslag die
ontstaat
Grootte Size exclusion chromatography Scheiding op molecuul grootte
Iso-elektrisch punt Ion exchange chromatography Scheiding op lading
Specifieke binding Affinity chromatography Scheiding op specifieke bindingen.
Als je eiwitten gaat zuiveren loop je altijd tegen kleine dingen
aan…
1. Als je iets heel zuiver wilt hebben is dat vaak ten koste van
opbrengst, maar de kosten gaan omhoog.
2. Als je veel opbrengst wilt hebben is dit vaak minder zuiver
en zijn kosten soms ook lager.
3. Als je een bedrijf hebt waar kosten belangrijk zijn, en alles zo
goedkoop mogelijk moet gaat dit zowel ten koste van de
zuiverheid als van de opbrengst.
Dus alles staat met elkaar in verbinding.
, Unit → hoeveelheid enzymen die in 1 min per 1µmol substraat zitten.
Tot. Activiteit → totale hoeveelheid
die je na een zuiveringsstap
overhoudt; in totaal U
Specifieke activiteit → U/mg →
activiteit in hoeveelheid eiwit
Recovering → percentage
overgebleven activiteit na een
𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡 𝑛𝑎
zuiveringsstap ; 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒 𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡 𝑣𝑜𝑜𝑟 ∗
100%
Zuiveringsfactor → verhouding specifieke activiteiten na t.o.v. van zuivering vooraf;
𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡 𝑛𝑎
𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑒𝑖𝑡 𝑣𝑜𝑜𝑟𝑎𝑓
Voorbeeld:
Aantal ml Totaal eiwit gehalte Enzymactiviteit (U/ml)
(mg/ml)
Voor zuivering 100 1*100 = 100 O,5
Na zuivering methode 25 1,3 *25 = 32,5 1,92
1
Na zuivering methode 0,4 0,1 *0,4 = 0,04 5
2
Totale activiteit
- Voor = 100 * 0,5 = 50 U
- Na methode 1 = 25 * 1,92 = 48 U
- Na methode 2 = 0,4 * 5 = 2 U
Recovery
- Methode 1 = 48/50*100% = 96%
- Methode 2 = 2/48*100% = 4%
Specifieke activiteit
- Methode 1 = 48/32,5 = 1,48 U/mg
- Methode 2 = 2/0,04 = 50 U/mg
Zuiveringsfactor
- Methode 1 = 1,48/0,5 = 2,96 keer zo zuiver
- Methode 2 = 50/0,5 = 100 keer zo zuiver
Homogeniseren → cellen kapot maken (lyseren) → kijken of je met een celwand te maken hebt of
celmembraan.
Methodes:
- Mechanische lysis
o Hoge druk
o Parelmolen
- Fysische lysis
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller daphnevandijk. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.03. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
53068 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now