100% satisfaction guarantee Immediately available after payment Both online and in PDF No strings attached
logo-home
Samenvatting les celfractionatie $4.82   Add to cart

Summary

Samenvatting les celfractionatie

 12 views  0 purchase
  • Course
  • Institution

Samenvatting les celfractionatie

Preview 2 out of 10  pages

  • May 26, 2022
  • 10
  • 2020/2021
  • Summary
avatar-seller
Celfractionatie
Scheiden en zuiveren van cellen en celorganellen: inleiding

Zuiveren van cellen:
 Centrifugatie op gradiënt
 Immunomagnetische scheiding
 Celsorting

Zuivering van celorganellen:
 Homogenisatiemedium
 Homogenisatietechnieken: mechanisch, enzymatisch, detergenten
 Fractionatie cel- en weefselhomogenaat

Waarom? in primaire culturen en weefsels zitten meer dan 1 celtype, gemengde culturen laten niet
toe een effect aan 1 celtype toe te schrijven

Scheiden en zuiveren van cellen
Centrifugatie
 Evenwichtsdichtheits- of gradiëntdichtsheids- of isopycnische centrifugatie
 Scheiden van de componenten o.b.v. dichtheid
 Dichtheidsgradiënten worden bekomen door verschillende lagen gradiënt media op elkaar te
plaatsen in een proefbuis
o Na centrifugatie: zwaarste laag onderaan, lichtste bovenaan
o Componenten uit de oplossing zinken naar beneden tot de positie wordt bereikt
waar de dichtheid van de omgevende vloeistof dezelfde is als die van de component
 Als evenwicht wordt bereikt -> duur van centrifugatie heeft geen belang meer

Toepassing: lymfocyten
-> uit bloed kunnen 1-2 x 10^6 lymfocyten/ml worden opgezuiverd waarvan 98%
CD45+ (membraaneiwit dat als Ag dient op leukocyten) en bestaat uit T en B
lymfocyten




Immunomagnetische scheiding
 Paramagnetische korrels (1-4,5 micrometer)
 Oppervlaktelaag van de korrels bevat hydroxyl en epoxidegroepen voor covalent binden met
AL
 Direct: primair AL van magneetkorrel bindt met specifiek AG in de cel
 Indirect:
o Primair AL tegen specifiek AG in cel worden eerst op de cellen gebonden
o Magneetkorrels waarop secundaire AL zijn gebonden worden aan de cellen
toegevoegd
 Cellen gebonden aan magneetkorrels door Ag-AL reactie worden gecollecteerd door
magneet aan de zijkant van celbevattend recipiënt te plaatsen

1

,  Toepassing: isolatie van bepaald celtype, verwijderen van ongewenste cellen uit een mengsel




Flowcytometrie
= techniek die multiparametrische analyse van cellen of deeltjes toelaat terwijl ze in een
vloeistofstroom cel per cel doorheen een laserstraal passeren
 Kenmerken van individuele cellen meten door hun interactie met laser
 Cellen/deeltjes scheiden van elkaar

Opbouw
 Fluïdum
 Optisch systeem
 Detectiesysteem
 Celsortingssysteem

1. Single cell suspension
2. Aan cellen wordt een fluorochroom-geconjugeerd AL toegevoegd
3. Fluïdum systeem: staal  vloeistofstroom waar de cellen opgelijnd worden zodat ze 1 voor
1 door het analyse/detectiepunt passeren (hydrodynamische focusering)

Hydrodynamische focusering:
-> deeltjesbevattendevloeistof wordt door cilinder gestuurd -> snelheidsgradiënt ontstaat bij
de deeltjes door wrijving t.h.v. de cilinderwand (viscous drag)
-> deeltjes worden naar centrum van vloeistofstroom gesleept (dragging)




4. Flow chamber: oplijning van cellen
-> 2 concentrisch vloeistofbevattende cilinders

2

The benefits of buying summaries with Stuvia:

Guaranteed quality through customer reviews

Guaranteed quality through customer reviews

Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.

Quick and easy check-out

Quick and easy check-out

You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.

Focus on what matters

Focus on what matters

Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!

Frequently asked questions

What do I get when I buy this document?

You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.

Satisfaction guarantee: how does it work?

Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.

Who am I buying these notes from?

Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller AVL2. Stuvia facilitates payment to the seller.

Will I be stuck with a subscription?

No, you only buy these notes for $4.82. You're not tied to anything after your purchase.

Can Stuvia be trusted?

4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)

71184 documents were sold in the last 30 days

Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now

Start selling
$4.82
  • (0)
  Add to cart