Dit document bevat een samenvatting voor het vak Moleculaire Biologie, de samenvatting is van de lessen gegeven in het academiejaar 2021/2022 periode 3 en 4. Alle behandelde hoofdstukken zijn hierin samengevat. Ook is er een samenvatting van de gastseminarie.
Farmaceutische En Biologische Laboratoriumtechnologie
Moleculaire Biologie
All documents for this subject (6)
3
reviews
By: layla-manaeva • 6 months ago
By: iliastaheri • 7 months ago
By: alyaaalbaidhani • 2 year ago
Seller
Follow
Alios
Reviews received
Content preview
Moleculaire Biologie P3-4
Nucleïnezuren extraheren & kwantificeren
Nucleïnezuren extraheren
Toepassingen van moleculaire diagnostiek:
Medische, forensische en voedselveiligheid
Medische toepassing
Microbiologie: detectie van virussen, bacteriën, parasieten.
- Klinische vraag: Is de patiënt besmet met X (met X een virus, bacterie of parasiet)?
Oncologie: genetische factors voor kankers opsporen-> tumors. Kan de prognose bepalen en
kan gebruikt worden voor de opvolging.
- Klinische vraag: Is de kanker teruggekeerd?
Genetische: bestuderen van genetische ziekten-> pre- en postnataal
- Klinische vraag: Heeft deze foetus trisomie?
Forensische toepassing
Identificatie van personen en vaderschapstesten
- Klinische vraag: Is de verdachte de dader, kom het DNA van de verdacht overeen met
die van de dader?
Voedselveiligheid
Opsporen van pathogenen.
- Klinische vraag: Is het voedsel besmet?
Stalen
Afhankelijk van de type analyse en klinische vraag.
- Wissers
- Perifeer bloed; WBC, cfDNA of ctDNA
- Beenmerg, CVS
- Urine/faeces
- Weefsel-> tumorweefsel
- Chorionvilli-> Vlokkentest-> stukjes van de placenta
- Amnionvocht-> vruchtwaterpunctie
DNA of RNA?
DNA is stabiel en RNA is vrij onstabiel. Dus bij voorkeur DNA, maar in bijzondere gevallen
RNA.
- RNA virussen-> door RT in cDNA
- Genexpressie-> tumor-> brengt hoge genexpressie i.v.m. normaal cel
- Translocaties-> oncologie-> ontstaan van fusiegenen-> opsporen van translocatie in
mRNA
,Procesflow
- Biopt fixeren met formaline en in een parafine blok plaatsen-> coupes
- DNA-extractie-> afhankelijk van toepassing is de opslag anders
- Kwantificeren-> voor verschillende technieken-> qPCR, PCR
Organische extractie:
- Enkel bij moeilijke stalen bv. bodemstalen
- Enzym toevoegen om cellen los te maken bv. proteinase K
- Lyse stap-> detergent dat cel gaan oplossen-> inhoud cel en kern komt los
- Organisch solvent toevoegen-> vortexen en centrifugeren
- Supernatans: DNA, tussen fase: proteïne en onderaan: lipiden
- Supernatans af pipeteren-> redelijk zuiver DNA
Chelex extractie:
- goedkope en simpele manier-> extract bevat veel onzuiverheden-> enkel PCR en geen
ingewikkelde technieken.
- Cellen in suspensie in een alkalische buffer-> Chelex toevoegen
- Opkoken-> cellen lyseren, EW denaturen en DNA komt vrij
- Chelex gaat divalente kationen binden-> inhibeert de daaropvolgende stappen
- Centrifugeren-> supernatans met DNA en chelex pellets met cel resten, EW en
divalente kationen
- Supernatans over gepipetteerd-> niet zuiver DNA en niet bruikbaar voor complexe
technieken.
- Chelex: polymeer bolletjes hebben 2 neg. ladingen die gaan binden aan divalente
kationen.
Solid phase extractie:
, - zuiver DNA-extractie.
- De vaste fase zijn paramagnetische beeds
- Kunnen binden aan DNA en worden aangetrokken door magneten.
- Kan ook met kolommen:
o Het cellysaat binden aan een kolom
o DNA bindt aan de kolom
o Elueren-> zuiver DNA-extract
o Belangrijk: veel zout aanwezig vanaf het begin-> chaotroop zout
DNA binden aan silicagel dmv zoutbruggen.
o Bij elutie geen zout-> breekt zoutbruggen
o DEAE-kolommen: diethylaminoethanol-kolom-> positieve lading dat kan
binden met DNA. Geen zoutbrug nodig. Voor elutie pH stijgen of zout
toevoegen.
RNA-extractie:
- Kolom en beeds aangepast zodat RNA kan binden.
- Altijd een stap met Dnase.
- Al het materiaal moet ook RNase vrij zijn.
- mRNA extractie:
o gebaseerd op het feit dat er een poly-A staart is.
o Een poly-T oligo T met biothine-> bindt met een magnetische beed gecoat
met striptovidine.
Nucleïnezuur kwantificeren
De kwantificatie technieken zijn niet allemaal even gevoelig, dit is afhankelijk van he type
staal en de toepassing. Zeer lage concentraties kunnen kwantificeren in kleine volumes.
Hoeveel DNA? Hoeveel RNA? Wat is de kwaliteit? Is het intact? Hoe zuiver is het?
Spectrofotometrie
Absorbantie van DNA max. bij 260nm. UV-spectrofotometer-> zeer kleine volumes.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller Alios. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.66. You're not tied to anything after your purchase.
