Workshop microscopie review
● Met de lichtmicroscopie kun je gekleurde preparaten
bekijken e.g. cellen/weefsel of de enzymactiviteit en de
lokalisatie ervan d.m.v. antilichamen
● Preparaten worden met wit licht bekeken zodat het
kleurecht is → wit licht is opgebouwd uit een spectrum
van UV tot infrarood
● UV licht heeft veel energie maar een korte golflengte
● Infrarood heeft weinig energie maar een lange
golflengte
● Resolutie = de afstand tussen 2 punten waarbij je
die kan onderscheiden van elkaar → hoe kleiner,
hoe beter de resolutie!
● De resolutie van een lichtmicroscoop = 1/10 μm
● De resolutie van een SEM = 1^-5 nm
● De resolutie van een TEM = 0.1 nm
−−> 𝑐 * Ω / 𝑁𝐴
c = constante (=o.6)
Ω= de golflengte
NA = numerical aperture (deze staat op de objectief)
● Hoe groter de numerical aperture, hoe beter → een
NA van 1 is eigenlijk heel goed!
● Aberration correction = wanneer er binnen in de lens
nog meerdere lenzen zitten die het beeld focussen
naar een punt → hoe groter de vergroting, hoe meer tussen lenzen er aanwezig
zijn en hoe hoger de NA
, ● De fluoroscentiemicroscoop kun je gebruiken om immunostainings en tags te
bekijken → hierbij geldt: hoe dunner de coupe, hoe beter de details
● Bij een directe kleuring zit het antilichaam primair gebonden aan de epitope
● Bij een indirecte kleuring maak je gebruik van een secundaire antilichaam die
bindt aan de epitope
● Rood, groen en blauw vormen samen wit licht!
● Groen = alexa 488
● Blauw = alexa 644
● Rood = alexa 568 → zijn chemische moleculen die het
preparaat diep doordringen en die dan gaan fluoresceren
● Bij een fading, doft de fluorescentie uit waardoor je het
niet meer kan zien
● Fluorescentie komt tot stand doordat energie (excitatie) terugvalt en het
spectrum dan verschuift waardoor andere licht wordt uitgezonden (emissie)
● Bij fluorescentie microscopen heb je een lichtbron nodig, wat dan pieken van licht
uitstraalt e.g. HBO /XBO
● Het licht gaat dan door de excitatie filter, wat dan bepaald welke excitatie licht
wordt uitgezonden en gaat dan door de emissie filter
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller kelly-lan. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $7.01. You're not tied to anything after your purchase.