100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting Moleculaire en biochemische technieken COURSE 5, BLOK 2 $8.91
In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)
  4.  
  5. Moleculaire En Biochemische Technieken

Samenvatting

Samenvatting Moleculaire en biochemische technieken COURSE 5, BLOK 2
 4 keer verkocht
  • Vak
  • Moleculaire En Biochemische Technieken
  • Instelling
  • Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)

Dit is een samenvatting van de course 5 theorielessen over moleculaire en biochemische technieken. Zelf heb ik na het leren van deze samenvatting een 8.2 gehaald voor de thematoets.

Voorbeeld 2 van de 15  pagina's

Document informatie

  • 16 juni 2022
  • 15
  • 2020/2021
  • Samenvatting

Onderwerpen

  • bml
  • tweede jaar
  • thematoets
  • han
  • moleculaire en biochemische technieken

Geschreven voor

  • Hogeschool Arnhem en Nijmegen (HAN)
  • Biologie En Medisch Laboratoriumonderzoek
  • Moleculaire En Biochemische Technieken
Alle documenten voor dit vak (10)

Verkoper

avatar-seller
tessdekleijn

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

BLOK 2 les 1:




Thrombine site wordt ingebouwd en hier kunnen proteases het GST eiwit losknippen van IDH1. Dit is
geknipt van het geproduceerde eiwit, dus niet uit de plasmide.

Je moet rekening houden (bij eiwitexpressie) met..
De voordelen: E. coli is goedkoop, makkelijk aan te passen en groeien snel.
De nadelen: Codon bias, verkeerd gevouwde eiwitten, postranslationele modificatie




Codon bias ‘hoeveelheid dat een codon voorkomt’:
een codon van 3 nucleotiden wordt omgezet in 1
aminozuur. Zo kan een bepaald codon vaker
voorkomen dan een ander. Bijvoorbeeld arginine is
de codon AGA in humane cellen, echter heeft E. coli
vaker de codon CGU voor arginine. Er zijn dus weinig
tRNA’s die AGA coderen voor arginine en veel voor
CGU.
Eiwitvouwing (misfolding): door heterogene expressie is er een grote kans op verkeerd gevouwen
eiwitten. Verkeerd gevouwen eiwitten hopen zich op in inclusielichamen (uiteindelijk in de celpellet)

Les 2: om eiwit tot expressie te brengen moet je bacterie induceren. 2 dingen moeten gebeuren
voordat transcriptie van IDH1 kan plaatsvinden… namelijk:
Repressor eiwit (LacI of AraC) moet van operator sequentie af en RNA polymerase moet expressed
worden en binden aan promotor (T7 /tac/araBAD)
In het lab wordt geinduceerd met IPTG of arabinose, er wordt mid-log fase (groeifase) voor E.coli
gekozen om dat de cellen dan actief zijn en bereid zijn om eiwit tot expressie te brengen

Hoeveel van de IPTG of arabinose (inducer) voeg je toe? Te veel kost veel geld
en kan ook negatief werken. Verder kost het veel tijd.
Het eerste wat je moet weten is welke concentratie je toevoegd van inducer
molecuul. Hier kun je achter komen door verschillende samples verschillende

, concentraties toe te voegen. Alle andere omstandigheden blijven gelijk. Hier valt ook te zien dat je
productie afneemt bij een te lage of te hoge concentratie IPTG. Hier zou gekozen kunnen worden
voor 64 uM IPTG.

Hoe lang laat je dit inducer molecuul in het sample, wat is de optimale
inductie tijd? Opnieuw wordt hetzelfde experiment toegevoegd maar dan
met 1 concentratie inducer molecuul, en bij diverse tijden. Hier zou de
goede keuze 18 uur zijn.

Eiwitisolatie en zuivering
Celdisruptie/lyse manieren en nadelen
Het doel van deze manieren is het
verstoren van gedeelte van de celwand
of gehele cell om biologische moleculen
vrij te laten komen, zoals eiwitten




Ultrasonicatie (wordt gebruikt tijdens praktijk), hier wordt
een naald in de sample gestoken en geeft micro-
geluidsgolfen af. Door de geluidsgolven ontstaan er
gasbelletjes die continu krimpen en groter groeien. Als het groot genoeg is imploseert het. Er
ontstaat een hotspot (hoge druk plek/scheurkrachten die sample uit elkaar scheuren, er is wel een
hele hoge temperatuur wat een nadeel is). Omdat het heet wordt moet sample continu op ijs blijven
staan.
De vervuilingen willen we er niet bij. Dus celresten kwijt raken door centrifugeren. Het eiwit zal dan
in het supernatant (want oplosbaar, kleine moleculen zitten daar die niet neerslaan), en de pellet zit
de bacterieresten dit mag weg (hier kunnen ook misvouwingen zitten van eiwitten, dan slaan ze neer
en komen ze in het pellet= verkeerd gegaan, eiwitproduct is dan weg) :(

Een eiwit moet onder goede condities bewaard blijven om te werken, het
is daarom best lastig om mee te werken want instabiel. Moet op ijs staan
want te hoge temperatuur= denaturatie (minder H-bindingen, eiwit
ontvouwt). Ook is het pH sensitief, pH kan de vorm van eiwitten
veranderen of ionische bindingen of H-bruggen beinvloeden.

Kort gezegd: denaturatie (ontvouwing), structuur
verlies je. Het kan (on)omkeerbaar zijn afhankelijk van
de situaties. Ook afhankelijk van de vouwing kunnen
eiwitten juist meer of minder oplosbaar zijn.

Met oplosbaarheid valt te spelen, namelijk salting.
• Inzouten: lage concentraties zouten verhoogt de oplosbaarheid van eiwitten
door de eiwit-eiwit-interacties te onderdrukken
• Uitzouten: hoge concentraties zouten verminderen de oplosbaarheid van
eiwitten door ionen hydratatie van zouten, zoutionen trekken watermoleculen
aan.
(neerslaan van eiwit), vaak gekozen hiervoor: Ammioniumsulfaat (NH4)2SO4

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper tessdekleijn. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor $8.91. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 64419 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis

Laatst bekeken door jou

Samenvatting ·

(0)

Samenvatting- literatuur & hoorcolleges - Licht verstandelijke beperking, jeugdhulp en jeugdbescherming

$8.91  4x  verkocht
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd