Summary
hoorcollege samenvatting CW
- Course
- Institution
hoorcollege samenvatting van CW. Ik heb hier samen met de PR en WC een 8 voor gehaald. dus dit goed leren en het komt goed.
[Show more]
Seller
Follow
selinedonkers
Content preview
CW hoorcollege samenvatting Seline DonkersVan cel tot weefsel
Hoorcollege 1
Cellen zijn functionele eenheden van leven.
Eencelligen: één enkele cel is voldoende om een levend individu te maken àbeperkte
aanpassingsmogelijkheden
Meercelligen: het voordeel is dat cellen zich meer en beter kunnen specialiseren àtaakverdeling en
meer aanpassingsmogelijkheden
Microscopie:
Vergroting, contrast en resolutie
Lichtmicroscopie (resolutie 200 nm): bright
field, geavanceerde lichtmicroscopie en
fluorescentie microscopie
Elektronenmiscroscopie (resolutie 1 nm):
scanning en transmissie
LM: zijn 3 benodigdheden: een fel licht moet op een
preparaat schijnen; preparaat moet doorlaatbaar zijn;
geschikte set lenzen nodig.
Verhogen van contrast met kleuringen
HE-kleuring:
Hematoxyline (blauw tot paars):
o Bindt aan negatief geladen moleculen (DNA, RNA en glycoproteinen)
o Positief geladen
Eosine (roze tot rood):
o Bindt aan positief geladen moleculen zoals eiwitten in bepaalde secretiegranula
o Negatief geladen.
Maken van coupes:
Fixeren
Inbedden in een matrix
Coupes maken (enkele um dik)
Kleuren
De plasmamembraan is ~7 nm dik en lichtmicroscopisch dus alleen
zichtbaar wanneer deze schuin is aangesneden.
Fase contrast microscoop
Wordt gebruikt o.a. voor het bestuderen van een levende
ongekleurde cel
Achtergrond belichting wordt gescheiden van door het object verstrooide licht
Contrast door verschuiving in de fase van lichtgolven van passerend licht
Fluorescentie-microscopie: voor detectie van specifieke moleculen:
Fluorophore kunnen direct of indirect aan een specifiek molecuul worden gekoppeld
Geschikt voor lokalisatie van die specifieke moleculen, ook in zeer kleine structuren
Gelijktijdig gebruik meerdere fluorochromen mogelijk
1
,CW hoorcollege samenvatting Seline Donkers
Toepasbaar zowel op gefixeerde als op levende cellen
Fixeren àinbedden en coupes maken àpermeabiliseren van
membranen àimmuno-labelen met specifieke antilichamen
àlabelen van 1e antilichaam met 2e fluorescent antilichaam
àfluorescentie-microscopie
Voor resolutie < 200 nm elektronen microscopie
Scanning elektronen-microscopie: Detectie oppervlakte van
structuur
Weefsel of cellen chemisch fixeren
Geen coupes maken
Opdampen met zwaar metaal verstrooiing elektronen dingen zien
Transmissie elektronen-microscopie: detectie structuur in een dun plakje
Fixeren met een aldehyde àinbedden en coupes maken à(immuno-labelen met goud bolletjes)
àcontrasteren met zout oplossing van zwaar metaal
Chemisch fixeren met een aldehyde
Inbedden in een matrix (b.v. plastic)
Coupes (plakjes) maken
Optioneel: immuno-labelen met goud bolletjes
Contrasteren met zoutoplossing van een zwaar metaal
Detectie van een specifiek eiwit met elektronen-microscopie
Fixeren
Inbedden en dunne coupes maken (voor TEM)
Immuno-labelen met specifieke antilichamen
Labelen van 1e antilichaam of 2e antilichaam met colloidaal goud bolletje
Contrasteren met zout van zwaar metaal
Transmissie elektronen microscopie
Productie van polyclonale antilichamen
1. Injecting antigen into rabbit
2. Antigen activates B-cells
3. Plasma b-cells produce polyclonal antibodies
4. Obtain antiserum from rabbit containing polyclonal antibodies.
2
,CW hoorcollege samenvatting Seline Donkers
Productie van monoclonale antilichamen
1. Mouse challenged with antigen
2. Spleen (milt) cells fusion with myeloma cells
3. Hybridomas
4. Culture in HAT medium select for positive cells
5. Harvest monoclonal antibodies
Chemisch fixeren permeabiliseren labelen
Detectie van een specifiek antigen met fluorescente antilichamen
Weefsel of cellen fixeren
Weefsel inbedden en coupes maken (niet nodig voor losse cellen)
Permeabiliseren van membrane met detergents
Immuno-labelen met antigen specifieke fluorescente antilichamen
Fluorescentie-microscopie
Volgen van eiwitten in levende cellen met fluorescente eiwitten.
Sommige dieren maken green fluorescent protein (GFP). Dit is een eiwit dat van zichzelf
fluorescerend is. Deze kan geïsoleerd worden en geplakt worden aan een gen (actinegen).
Deze wordt in cel geplaatst mRNA wordt gemaakt je hebt 1 stuk actine en 1 stuk
fluorescent eiwit. Zo kan je een cel fluorescerend maken en dus zien waar eiwit in cel
bevindt.
Specifieke celtypen zichtbaar maken met fluorescente eiwitten door genetische manipulatie
Hoorcollege 2 Subcellulaire opbouw
Relevantie voor ziektes:
Alle ziekteprocessen vinden hun oorsprong in cellen of leiden tot beschadiging van cellen
Voor regeneratieprocessen zijn celfuncties noodzakelijk
Daarom is het noodzakelijk om elk ziekteproces op cellulair niveau te leren begrijpen
Daarvoor is ook kennis van het normale functioneren van cellen vereist
Prokaryoten:
Eencellige organismen
Relatief simpele structuur, omgeven door binnenste (impermeabel) en buitenste
plasmamembraan (permeabel)
Erfelijk materiaal opgeslagen in circulair DNA-molecuul
Geen intracellulaire membranen
Eukaryoten:
3
, CW hoorcollege samenvatting Seline Donkers
Eencellige (bv. gist) of meercellige organismen (planten en dieren)
Complexe structuur: kern, organellen en cytoskelet
Erfelijk materiaal opgeslagen in lineaire DNA-moleculen (chromosomen)
Evolutionair ontstaan van de kern en andere intracellulaire compartimenten:
Prokaryoot maakt een instulping in zijn plasmamembraan welke afsnoert à blaasje
Wanneer dit blaasje wordt platgedrukt ontstaat de nucleaire envelop met twee membranen à
endoplasmatisch reticulum (continu met de nucleaire envelop).
Wanneer blaasjes loslaten van het ER à Golgi en endo-/lysosoom à vacuolaire systeem
Organellen liggen in compartimenten omdat:
Optimalisatie van een milieu, aangepast voor specifieke taken
Scheiding opeenvolgende taken
Vergroting membraanoppervlak voor membraan afhankelijke reacties/taken
Evolutionair voordeel
Evolutionair ontstaan van de kern en andere compartimenten van vacuolaire systeem:
Vacuolaire systeem
Secretie route: eiwitten naar ECM
Endocytose route: communicatie
Mitochondriën zijn geen onderdeel van het vacuolaire systeem en zijn apart daarvan
gerevolutioneerd:
4
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller selinedonkers. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $5.93. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67096 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now