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Apuntes Anatomía Patológica y Citodiagnóstico
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Apuntes de biología molecular sobre cultivos celulares.
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ngelagarrido
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CULTIVOS CELULARES1. INTRODUCCIÓN
CULTIVO CELULAR: conjunto de procesos que hacen posible
el mantenimiento de cél. de organismos pluricelulares in vitro,
preservando al máximo sus características fisiológicas,
bioquímicas y genéticas.
Lab. en el que tienen lugar lab. de cultivos celulares
1.1. TIPOS DE CULTIVOS CELULARES
CULTIVO DE ÓRGANOS:
Mantener órgano entero o parte de él en interfase entre medio de cultivo artificial y
atmósfera controlada
Se mantienen vivos por un tiempo limitado: tipos celulares diferenciados, estructura
histológica y arquitectura del órgano
No pueden propagarse mayor parte de tipos cél. no proliferan solo hay
crecimiento de cél. indiferenciadas o embrionarias fundamentalmente en zona
periférica que no conservan estructura tisular típica
Uso:
o Estudiar interacciones y relaciones intercelulares
o Respuestas a estímulos y sustancias
o Estudios regenerativos
o …
CULTIVO DE EXPLANTES:
Adherir fragmento de tejido a superficie y nutrirlo con medio de cultivo
Cél. periféricas se multiplican y proliferan, migrando por la superficie del soporte
Cultivos como: vellosidades coriónicas, tejidos epiteliales…
CULTIVO DE CÉLULAS:
A partir de suspensiones celulares, que se introducen en recipiente adecuado junto
con medio de cultivo y se incuban en condiciones óptimas para que las cél. proliferen
Cultivo más habitual, realizado a partir de muestras de cualquier tejido, restos
ovulares, líquido amniótico…
Según la procedencia de la suspensión celular de partida:
o Cultivo celular primario:
Suspensión de partida se obtiene disgregando cél. de un tejido por
métodos mecánicos o enzimáticos
Se obtiene mezcla celular compleja formada por los tipos celulares
del tejido
Se puede hacer a partir de esta mezcla o seleccionando un tipo celular
concreto
o Cultivo celular secundario:
Suspensión de partida se obtiene de cultivo primario o de otro
secundario por subcultivo o pase, o por línea celular congelada
1.2. APLICACIONES DE LOS CULTIVOS CELULARES
INVESTIGACIÓN BÁSICA:
Metabolismo celular
Interacciones celulares
INVESTIGACIÓN APLICADA:
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, Potente herramienta en biotecnología con aplicaciones industriales:
o Inmunología producir ac monoclonales
o Virología producir vacunas
o Farmacología producir fármacos
o Toxicología estudios de citotoxicidad, carcinogénesis y mutagénesis
APLICACIONES MODERNAS E INTERESANTES:
Ingeniería de tejidos: conseguir producción in vitro de tejidos (cultivos histotípicos)
y órganos (cultivos órganotípicos) uso en injertos y trasplantes
Estudio con cél. madre o stem cells. uso en terapia celular
2. BIOLOGÍA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO
A las cél. en suspensión se les añade el medio de cultivo, se introducen en recipiente adecuado y
se incuban (óptimas condiciones de Tª y humedad) cél. crecen
2.1. CURVA DE CRECIMIENTO DEL CULTIVO
Dinámica del crecimiento de un cultivo concentración de cél. por días de evolución
representada en curva de crecimiento.
Curva de crecimiento es una curva sigmoide (y=cél. /ml; X: días de cultivo) en la que hay 3 fases:
Fase de latencia:
o Tramo recto sin pendiente
o Primeras 24 horas
o No hay crecimiento nº de cél. constante o incluso disminuir poco
Fase de crecimiento exponencial:
o Recto con pendiente elevada
o Dura 6-7 días
o Nº de cél. aumenta de manera exponencial hasta
llegar a un máximo
Fase estacionaria:
o Tramo recto de pendiente nula
o A partir de los 6-7 días
o Nº de cél. constante
2.2. FORMAS DE CRECIMIENTO
CRECIMIENTO EN MONOCAPA:
Cél. crecen adheridas en superficie sólida (plástico o vidrio)
Cél. dependientes de anclaje necesitan adherirse a superficie sólida para crecer
Usado para mayoría de las cél.
Etapas:
o Adhesión a una superficie: cél. se van adhiriendo. Coincide con periodo de
latencia de la curva.
o Proliferación y formación de colonias: cél. ya pegadas a la pared, empiezan a
proliferar, se expanden por toda la superficie y forman colonias. Coincide con la
fase exponencial de la curva de crecimiento.
o Inhibición por contacto: cél. ocupan toda la superficie disponible y entran en
confluencia estableciendo contacto entra ellas, fenómeno llamado inhibición por
contacto, cél. detienen crecimiento (pero siguen vivas). Inicia fase estacionaria
de la curva morfología y fisiología de cél. se parecen más a las de las cél. de
origen.
Para que retomen el crecimiento se hace subcultivo o pase de parte de cél. a nuevo frasco
momento perfecto es la fase exponencial.
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