Summary
Samenvatting Werkzitting 1 immunologie
- Course
- Institution
Werkzitting 1 immunologie
[Show more]
1 review
By: xthundercloudx • 8 months ago
Seller
Follow
paulinebal
Reviews received
Content preview
Immunologie werkzittingIn labo: wat heb je nodig en hoe kan je eraan geraken
Vraagstelling:
Hoe kunnen humane monocyten/macrofagen na infectie bij een patiënt de antimicrobiële respons
versterken door neutrofiele granulocyten aan te trekken om de infectie te bestrijden?
Antwoord: In vitro methode voor dit na te gaan:
Met of zonder gebruik van m-o
Materiaal nodig voor experiment op te starten
1) Macrofagen en monocyten zuiveren:
uit humaan bloed (zitten in bloedbaan)
(bloedstaal bevat RBC, bloedplaatjes, plasma en WBC (monocyten))
=> zuivere monocyten
2) Je wil zien wat er bij antimicrobiële respons gebeurt: stof toevoegen voor stimuleren
Optie 1: MET gebruik m-o: toevoegen levende bacterie of virus aan monocyten
Optie 2: ZONDER gebruik m-O
G- bact: LPS toevoegen vs G+ bact: peptidoglycaan, flagelline vs virussen: dsRNA
=> liganden voor de tol-like-R
3) Je wil neutrofielen aantrekken => dit kan door chemokinen
=> dit moeten de monocyten produceren
Extra: bij muis:
kan macrofagen via peritoneum afnemen => hier zitten veel macrofagen
+: je kan in vivo werken: echte infectie van de muis: in het organisme doen)
Hoe bekom je de cellen en wat ga je er mee doen?
1. Zuiveren monocyten
Optie 1 : Isolatie PBMCs uit bloed:
=> werk met WBC, NK cellen, lymfo- en monocyten
1) Medium nemen bv. ficoll
2) Pipeteer hierop bloed
3) Centrifugeer 30min => °scheiding: onder RBC – granulocyten (zie je niet: zijn minder dan RBC)
– medium – witte band met PBMCs (WBC: lymfo- en monocyten, NK cellen) – plasma
1
, Optie 2 : zuiveren specifiek monocyten
=> dmv flowcytometrie cel per cel sorteren (langs laser) => traag)
dmv magnetische beads (snel)
positieve selectie: Ab’s tegen monocyten op magnetische beads bv. CD14
nadeel: kan dat beads een effect hebben op je mole
negatieve selectie: 1e zuiveren PBMC’s, dan gebruik Ab’s tegen lymfocyten en NK cellen
=> enkel monocyten lopen door (+: geen effect v/d beads)
Inductie experiment:
Kweek de cellen (monocyten) met bepaalde celconcentratie in 24 well plaat in groeimedium
=> incuberen cellen: 37°C (humane cellen), foetaal kalfsserum (met GF),
zoutoplossing (geen osmotische shok); buffer: CO2 incubator (stabiele pH) (24-48u)
=> toevoegen verschillende stoffen => stimuleren monocyten:
TLR liganden (G+, G-, virus)/cytokinen => microbiële respons
=> Cytokine 8 (IL8) (meest gemaakt door monocyten en meest actief) vrijgezet door monocyten
=> meet hoeveelheid geïnduceerd chemokine in bovenstaande vloeistof (na centrifugatie) met
immunologische test
2. Immunologische test gebruiken voor concentratie IL-8/ CXCL8
bepalen
Concentratie IL8 bepalen
welke test?:
ELISA (meest effectief), RIA, (in cyto kijken of IL-8 productie)
western blot (moeilijk voor juiste conc. bepalen, +: je ziet ook MW van eiwit)
maak schema met verschillende stappen (zie slide 11-14)
maak lijst met nodige materiaal en reagentia
hoe bekom je de reagentia?
Reagentia nodig voor de immunologische test: Ab’s nodig
Ab’s maken:
- Polyklonale Ab maken:
w gesecreteerd door meerdere klones Ag-specifieke B cellen
Immuniseer konijn meerdere x’en met Ag
met adjuvans (alum, CFA, poly I:C => sterkere respons)
=> proefdier bloed afnemen => Ab’s uit serum zuiveren: bloed laten stollen (cellen in stolsel)
=> °zuiver serum => affiniteitschromatografie:
ofwel covalent Ag (IL8) op kolom zetten (maar is duur, wel zeer specifiek)
ofwel matrix met proteïne A of G op kopen (alle Ab’s zullen binden => crossreactie,…)
voordeel: kan meerdere keren bloed nemen van 1 muis, Ab’s tegen ≠ epitopen,
polyklonaal Ab => agglutinatie en neerslag (immunoprecipitatie)
nadeel: ≠ bloedingen => Ab’s met ≠ affiniteit, crossactiviteit tgn ander Ag
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller paulinebal. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.75. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
72042 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now