Summary
Samenvatting moleculaire- en biochemische technieken course 5 blok 1
- Course
- Institution
moleculaire- en biochemische technieken lessen gegeven in course 5 blok 1
[Show more]
Seller
Follow
linngeubbels
Content preview
Samenvatting moleculaire- en biochemische techniekenPCR
- Kan alleen op DNA
- DNA replicatie in een epje
- Master mix (pipeteer mix)
o DNA primers (forward en reverse)
o DNA template
o Nucleotiden nodig (DNTP)
o Cofactoren nodig (MgCl2)
(Magnesion is de cofactor)
o DNA polymerase
o Buffer voor stabiele pH
- PCR reactie
o Aan 3 accent einde gaat DNA
polymerase nieuwe nucleotiden
koppelen
o Van 5 naar 3 accent
Stappen van de PCR
- Stap 1: denaturatie
o Hoge temperatuur omdat zo de dubbele helix loslaat
o 95 graden
- Stap 2: Annealing
o Forward en reverse primer kunnen gaan binden
o Van 5 naar 3 kan DNA polymerase nieuwe nucleotiden gaan binden
o 50 tot 60 graden
5 graden onder smelttemperatuur van primer
- Stap 3: Elongatie
o Synthetiseren van DNA
o TAG polymerase
o 72 graden
o Tijd berekenen
DNA template
- Bevat DNA fragmenten die amplified kunnen worden
o Plasmide DNA
Bacterieel
o Genomisch DNA
Bevat intronen
o cDNA
- Template DNA niet te veel en niet te weinig toevoegen
o Geen of teveel reacties
- DNA is helemaal gedenatureerd om het enkelstrengs te maken
, DNA polymerase
- TAG DNA polymerase
o DNA polymerase die geïsoleerd is uit thermus aquaticus
o Nadeel: Heeft geen proofreading
- Pfu DNA polymerase
o Heeft wel proofreading
o Handig als er een gen tot expressie wordt gebracht
Forward en reverse primers
- Nodig om DNA polymerase van nieuwe 3 accent einde te voorzien
- Goede primers nodig
o Primer plaatsen aan het 3 accent einde van het DNA
o Bovenste streng reverse primers
o Onderste streng forward primer
- Primers 18 tot 24 nucleotides lang
o Minder is niet specifiek
o Annealing temperatuur zorgt er voor dat de primer alleen specifiek zal binden
- Condities
o CG content van 50 tot 60%
o 3 einde moet een C of G bevatten
o Niet langer dan 24 nucleoides
o Verschil tussen primers 1 tot 2kb
o Verschillende smelttemperaturen binnen 5 graden verschil van elkaar
o Smelttemperatuur onder 70 graden
- Smelttemperatuur
o Temperatuur die nodig is om de DNA duplex uit elkaar te halen
Primer van template af te halen
o Bepaald door aantal binden AT en GC
GC kost meer energie en hogere smelttemperatuur
AT kost minder energie
o Tm= 4(C+G) + 2(A+T)
o Het maximale temperatuurverschil mag 5 graden zijn
o Annealing temperatuur
Ta= Tm – 2 tot 5 graden
Primers
- Te korte primer
o Niet specifiek genoeg
o Grote kans op meer hechtingsplaatsen
- Te lange primer
o Dan wordt de smelttemperatuur hoger
o Hogere annealing temperatuur
o Niet handig omdat deze op elongatie temperatuur gaat lijken
- Primer design
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller linngeubbels. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.96. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67474 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now