Summary
Samenvatting Moleculaire en biochemische technieken course 5 blok 2
- Course
- Institution
Samenvatting Moleculaire en biochemische technieken course 5 blok 2
[Show more]
Seller
Follow
linngeubbels
Content preview
Samenvatting moleculaire en biochemische techniekenPlasmides
pBAD/HIS vector
- pBAD/HIS
o AraC
o pBAD promotor
o 6x HIS tag
- Zonder inductie
o AraC bind aan AraI en AraO site waardoor promotor niet kan binden
o Er komt geen IDH-1 tot expressie
- Met arabinose
o RNA polymerase wordt gemaakt en bind aan promotor
o AraC eiwit wordt ook gemaakt
o Induceren met arabinose
o AraC bind aan de inducer sites
o RNA polymerase kan aan promotor binden
o De HIS tag zit aan het IDH-1
o Je krijgt de tag HIS (6 aminozuren)
Zonder inductie Met inductie
,pGEX-4T1 vector
- LacI en Lac operator
o Inducer is IPTG
- TAG promotor
- GST tag wat aan het IDH-1 gaat binden
- Zonder inductie
o LacI codeerdt voor Lac reprossor eiwitten
Binden aan Lac operator waardoor er geen transcriptie kan plaatsvinden
o TAG promotor kan niet binden
- Met IPTG
o IPTG zal binden aan lac repressor eiwitten waardoor deze geblokkeerd zijn
o Nu kan de tag promotor binden
o Eerst wordt GST getransleerd en daarna MCS met het IDH-1 eiwit
o Je krijgt dus het GST fusie eiwit
Zonder inductie Met inductie
pET-15b
- BL21 cellen werken het beste met deze vector
- LacI en LacO
o LacI promotor
- T 7 promotor
- Onder inductie
o RNA polymerase wordt gemaakt
o Zal aan LAcI promotor binden maar lac repressie eiwit wordt gemaakt waardoor het
niet tot expressie komt
- Met IPTG
o IPTG bind aan lac repressie eiwitten
o In het genoom van de bacterie wordt ook LacI tot expressie gebracht
o RNA polymerase zal aan 2 promotoor binden
o T7 RNA polymerase wordt gemaakt
o 2e promotor in vector wordt geactiveerd door T7 RNA polymerase
o Nu komt IDH-1 tot expressie
, Zonder inductie Met inductie
pLysS vooral in pET-15b
- Amp en chloramphenicol
- Gen op T7 lysosomen te maken
o Lysosym komt altijd tot expressie
- Geen MCS
- Functie is het maken van lysozym
- Zonder inductie
o pLys blokkeert T7 RNA polymerase om
zo achtergrondexpressie te blokkeren
o T7 lysozym inactiveert T7 RNA
polymerase
- Inductie
o Repressors worden weggevangen
o T7 RNA polymerase wordt gemaakt en
kan aan T7 promotor binden
o IDH-1 wordt gemaakt
o Lysosym is er nog maar kan niet alle RNA polymerase wegvangen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller linngeubbels. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.95. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
53068 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now