Summary
Samenvatting Hoofdstuk 10 Moleculaire Biologie
- Course
- Institution
Zowel de slides als de aantekeningen van in de les zijn er in verwerkt. Met gewoon de samenvatting te leren, slaag je op het examen!
[Show more]
Seller
Follow
merelBMW
Reviews received
Content preview
H10: DNA TECHNOLOGIE10.1 FRAGMENTEREN VAN DNA
Observatie: bacteriën kunnen getransformeerd (= veranderd) worden doordat ze DNA uit de
omgeving kunnen opnemen
➔ geldt NIET voor elk DNA;
o DNA van bepaalde bacteriestammen werd dadelijk na opname afgebroken
o DNA van andere bacteriestammen bleef intact
➔ Er was een restrictie op het ‘soort’ DNA dat tot transformatie kon leiden
= aanwezigheid van endonucleasen die ‘vreemd’ DNA herkennen en afbreken
Endonucleasen = restrictie-enzymen: hydrolyseren de fosfodiesterbinding in de ruggegraat v/d
DNA keten en doen dit midden in een DNA fragment (i.t.t. de exonucleasen)
Restrictie-enzymen herkennen korte palindromische sequenties (4, 6-8 bp.) en knippen in of in de
omgeving van deze sequenties
➔ Meeste restrictie-enzymen knippen symmetrisch in de 2 DNA strengen v/d DNA dubbele
helix
➔ Na restrictie ontstaan ofwel blunt end uiteinden, ofwel 5’ overhangende uiteinden ofwel 3’
overhangende uiteinden
,Herkenningssequenties = restrictie-sites
→ restrictie-enzymen worden genoemd naar het organisme waaruit ze zijn afgezonderd
vb. EcoRI werd afgezonderd uit de E. coli stam R en kreeg het nummer I
Groot aantal restrictie-enzymen
→ het eigen DNA van de bacterie wordt beschermd tegen de restrictie-enzymen doordat de
bacteriën naast de restrictie-enzymen ook steeds een 2de enzyme bevatten dat specifieke basen in
de herkenningssites methyleert → deze sequentie kan niet meer herkend worden door de eigen
restrictie-enzymen
Met restrictie-enzymen lange DNA moleculen op reproduceerbare wijze fragmenteren
→ complexiteit v/h DNA wordt drastisch verminderd
RESULTAAT = dat 1 bepaald gen (en ook het hele genoom) steeds op dezelfde manier zal geknipt
worden → electroforese uitvoeren van dit geknipte genomische DNA → deze fragmenten zullen
gescheiden worden volgens lengte; het specifieke gen (of alle DNA fragmenten die het bevatten)
zal na de electroforese op een welbepaalde positie in de gel terechtgekomen zijn
, 10.2 TERUGVINDEN VAN EEN SPECIFIEK DNA FRAGMENT
Identificatie en isolatie v/h DNA fragment dat ons interesseert (bv. gen, enhancer, promotor, ORI)
→ gebruik maken v/d eigenschap dat DNA kan gedenatureerd worden en dat complementaire
DNA fragmenten kunnen hybridiseren
- Denatureren = het uit mekaar halen v/d 2 (complementaire) DNA strengen v/d dubbele
helix door de waterstofbruggen te breken
- Hybridiseren = het vormen van een dubbele DNA helix uit 2 enkelstrengige
complementaire nucleïnezuren (of RNA)
→ DNA fragment radioactief of fluorescent merken
→ na hybridisatie kan men het complementaire fragment in de gel lokaliseren
o Gemerkte fragment = probe
10.3 KLONEN VAN DNA FRAGMENTEN
10.3.1 PLASMIDEN
Plasmiden = minichromosomen die bij sommige bacteriën worden teruggevonden als
extrachromosomale, kleine, circulaire, dubbelstrengige DNAs
Plasmide moet een ORI bevatten om replicatie toe te laten (gaat anders verloren bij snelle
delingen v/d bacteriën) + een selectieve merker ( = gen dat codeert voor een bepaald voordeel
voor de gastheer; indien geen voordeel aan het dragen van plasmide zal dit snel verdwijnen)
Plasmiden gebruiken bij kloneren: reeks restrictie-sites naast elkaar inbrengen
→ leidt tot een ‘multiple cloning site’ of ‘polylinker’ → hierdoor kan men restrictiefragmenten van
verschillende kloneringsprojecten makkelijk in hetzelfde plasmide kloneren
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller merelBMW. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.96. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67866 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now
Recently viewed by you
