In dit hoofdstuk gaat het vooral over hoe we immunologie kunnen gebruiken en de verschillende toepassingen dat het heeft in het labo, een voorbeeld hiervan is dus een elisa
Immunologie: Toepassingen
Aanmaak van polyclonale antistoffen
Polyclonale antistoffen worden gesecreteerd door meerdere clones antigen-specifieke B-cellen. Deze
polyclonale antistoffen worden gebruikt in vaccins en dit zijn dus antistoffen tegen verschillende
epitopen.
In het bloed van een patiënt zijn allemaal antistoffen tegen verschillende eiwitten, maar die op een
andere plaats gaan binden en dus andere karakteristieken hebben. De antistoffen hebben allemaal
een andere binding en specificiteit. Het lukt niet bijna niet om vanuit polyclonale antigenen naar 1
specifiek antigen te gaan en dit zuiver te hebben.
Men gaat een persoon of proefdier 1 of meerdere keren immuniseren met Ag. Hier kunnen
adjuvantia voor gebruikt worden samen met het Ag om een sterkere respons te krijgen. Er wordt
dan bloed genomen van dit geïmmuniseerd dier/persoon. Uit het serum worden de polyclonale
antigenen gezuiverd.
- PRO
o Dit geeft een mengsel van Ab gericht tegen een waaier aan epitopen
o Polyclonale Ab geven goede agglutinatie en neerslag (immunoprecipitatie)
- CONTRA
o Crossreactiviteit tegen andere Ag kan optreden (1/100 kans)
o Verschillende bloedingen resulteren mogelijk in Ab met verschillende affiniteit
Aanmaak van monoclonale antistoffen
Een monoclonale antistof is een product van 1 enkel gestimuleerde B-cel. B-cellen kunnen niet
gekweekt worden, maar wel geïsoleerd. Om deze B-cellen toch te kunnen kweken moeten ze
fuseren met kankercellen die wel oneindig kunnen delen. De kankercel die gebruikt wordt is een
myeloma cel, die onsterfelijk is. Na de fusie van deze 2 cellen kan de B-cel wel gekweekt worden,
maar het moet in een specifiek medium = HAT medium.
Men gaat zorgen dat enkel de fusie cel gaat kunnen overleven en de niet gefusioneerde kankercellen
ook gaan sterven, naast de B-cellen die niet fusioneren. Vaak gaat de kankercel sneller groeien dan
de fusie cel, daarom moet deze weg.
Eens dat de fusie gebeurd is kan 1 enkele fusie cel vermenigvuldigen en kan het allemaal
dochtercellen aanmaken, wat een kloon is van die ene oorspronkelijke fusie cel. Gezien dat al de
antilichamen van 1 B-cel komen, is het monoclonaal en kan het maar 1 epitoop herkennen.
Selectiemechanisme groei van hybydomas en myolomas
Er moet een selectie zijn voor de gefusioneerde cel en de kankercellen die niet gefusioneerd zijn,
moeten vernietigd worden. Voor een cel om te kunnen delen moet eerst DNA synthese gebeuren
voor de celdeling. Als deze DNA synthese plat ligt dan kan er geen deling meer gebeuren. Dit is wat
men gaat doen bij de oorspronkelijke kankerlijn, maar niet bij de fusie cellen.
Men heeft knock-outs gemaakt van de kankercellen. Men heeft gezorgd dat er geen thymidine
kinase (TK) en hypoxathine guanine fosoribosyl-transferase (HGPRT) meer zijn. Indien deze er niet
meer zijn is er nog een “rescue” weg die gebruik maakt van uridylate om DNA te kunnen maken.
Bij het groeien van de myolomas gaat men deze rescue weg gebruiken omdat er geen aminopterine
in het medium aanwezig is (inhibitor van deze weg). Bij de fusie gaat men deze inhibitor gaan
, toevoegen en gaan de 2 enzymen niet werken en wordt de
rescue weg ook geïnhibeert. Omdat de fusie cel wel deze
TK en HGPRT hebben van de B-cellen kunnen deze wel
overleven en verder delen maar de kanker cellen niet.
Hoe ging de aanmaak concreet?
Starten bij een muis die men gaat immuniseren met een antigen zodat er tegen het antigen genoeg
antistoffen gemaakt worden, met een adjuvans dat erbij gevoegd kan worden voor een sterkere
reactie. De muis geeft een polyclonale respons. De cellen die deze antistoffen gaan maken zijn B-
cellen die vaak in de secundaire lymfoïde organen. Men gaat vaak de milt uit de muizen halen, om
daar de B-cellen uit te kunnen halen.
Deze cellen laat men fusioneren met de kankercellijn. Deze
fusie noemt men hybridomas. Waardoor er 3 types cellen
aanwezig zijn in het cultuur en men enkel de hybridomas wilt.
Deze hybridomas worden afgezonderd, doordat de B-cellen die
niet fusioneren sterven en de andere kankercellen die niet
fusioneren, ook gaan sterven door de DNA synthese plat te
leggen.
Uit de afgezonderde hybridomas kunnen dan cellen groeien tot
kleine klonen waarin monoklonale antistoffen aangemaakt
worden. In het supernatans van deze buisjes zitten de
antistoffen. Deze kunnen dan verder opgezuiverd worden.
Er zijn een aantal problemen die gepaard gaan met deze techniek:
- Uitschakkelen van de myeloma kankercellen
- Antistoffen maken die niet specifiek zijn tegen het antistof
- Uitzoeken via een ELIS welke klones positief zijn en deze selectief gebruiken om te weten
welk antistof tegen welk antigen gemaakt wordt
Aanmaak van chimere muis-mens antistoffen
Monoclonale antistoffen moeten bijna allemaal aangemaakt worden door
muizen. Gezien het antistoffen zijn van de muis die we willen gebruiken bij
de mens gaat dit een immuunreactie geven want deze stoffen zijn
lichaamsvreemd voor ons. Dit werkt in het begin wel, maar na een tijd
werkt het niet meer goed door de afstoting, en deze stoffen dus door ons
immuunsysteem weg gewerkt worden.
Men gaat hier een chimere muis-mens antistoffen van maken door de
herkenningsplaats voor het antigen te behouden maar de rest meer
humaan te maken. De variabele delen van het antigen gaan behouden
blijven, maar de constante delen van de antigenen gaat men aanmassen
naar humane eiwitten.
Humaniseren van monoclonale antistoffen
Men kan de antistoffen ook volledig gaan humaniseren. Men start nogsteeds bij de muis. Men gaat
dan een transgene muis haan maken waarbij de kluster van genen voor het maken van antigenen,
vervangen wordt door een humane kluster. De muis beschouwd deze antistoffen niet als vreemd
omdat deze er voortdurend mee in contact komt.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller saravanhecke23. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.23. You're not tied to anything after your purchase.
