Summary
Samenvatting Celcultuur en immunochemie: lesnota’s flowcytometrie
- Course
- Institution
Lesnota’s over het deel flowcytometrie van het vak celcultuur en immunochemie.
[Show more]
Seller
Follow
biomed2017
Reviews received
Content preview
CELCULTUUR:FLOWCYTOMETRIE
Academiejaar 2018-2019
Bronnen:
Deze samenvatting is gebaseerd op de PowerPoint’s en lessen van Prof. dr. Nathalie Cools
Afbeeldingen afkomstig uit de PowerPoint’s van Prof. dr. Nathalie Cools
,LES 1
Enkele begrippen
- PARAMETER (verschillende betekenissen)
o Fysische of chemische eigenschappen van een cel
Cytoplasmic granularity or nuclear DNA content
o Fysische eigenschap, gemeten door een sensor
Light scattering or fluorescence
o Fysische eigenschap van een cel-geassocieerd reagens
Intrinsic/Extrinsic, afhankelijk of ze als dan niet gemeten kunnen met sonde
- EXCITATIE
o Proces waarbij optische energie geabsorbeerd wordt
- EXTINCTIE COEFFICIENT (ε)
o Efficiëntie waarmee optische energie geabsorbeerd wordt (afhankelijk v golflengte)
- EMISSIE
o Proces waarbij optische energie terug vrijgesteld wordt
- QUANTUM OPBRENGST(Q)
o Efficiëntie waarmee energie wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
o Onafhankelijk van golflengte
- STOKES SHIFT
o Verschil in energie tussen excitatie en emissie golflengte max
- SPECTRUM
o Verdeling van excitatie en emissie golflengtes
Flow cytometrie - definitie
- Analyse van het woord:
o Flow = vloeistof
o Cyto = cel
o Metrie = meten
- Cytometry => fysische & chemische eigenschappen van cellen meten
- Flow cytometrie => hierbij worden metingen uitgevoerd terwijl cellen in een vloeistofsuspensie 1 voor 1
voorbij het meettoestel passeren
- Gebruik van flowcytometrie:
o Informatie over een celpopulatie verkrijgen
o + de verschillen in fysische & chemische eigenschappen tussen de cellen (=> de PARAMETERS)
o Gebeurt aan de hand van optische eigenschappen
- Flowcytometer (ruwe schets)
o Ruwe schets van wat er gebeurd:
Cellen in suspensie stromen als individuele partikels (1 voor 1) langs de laser (1 of meerdere
lasers)
Cellen gaan doorheen interrogatieunt (= waar laser de vloeistofstroom kruist)
o Belangrijk:
Cellen moeten een single cel suspensie vormen => 1 voor 1 lang de lichtbron
Cellen in die stroom brengen vereist hydrodynamische focussering
Individuele cellen verkrijgen
- Cellen/partikels in oplossing moeten erg klein zijn (0,2-150 um)
o Witte BC zijn bijvoorbeeld erg geschikt voor FCM
o Minder handig: biopten & tumorstalen
Hier: extra verwerkingsprocedure nodig (enzymatisch/mechanisch cellen dissociëren)
1
, Bouw flowcytometer
- Bevat steeds 3 delen
- Vloeistofsysteem (fluidics):
o = tank met vloeistof
o Zorgt voor transport van partikels/cellen in
vloeistofstroom naar de laser
- Optisch systeem (optics):
o Bestaat uit de laser -> aanstraling/excitatie van de
partikels
o Optische filters -> lichtsignaal naar juiste detector leiden
- Elektronica
o Zet lichtsignaal om in meetbaar elektronisch signaal
o Elektronisch signaal gaat verwerkt worden door de pc
Vloeistofsysteem
- Belangrijkste functie = transport van partikels
- 3 delen
o Sheath tank met geleidingsvloeistof
Zorgt voor hydrodynamische focussering
o Sample tube
o ‘Flow cell’
= hart van de flowcytometer
Daar: hydrodynamische focussering
- Druk:
o Druk sample hoger dan druk geleidingsvloeistof
o Druk op staal zelf ook groter dan druk op tank
- Optimale aanstraling gebeurt als:
o Celsuspensiestroom centraal in de laser ligt
o Maar 1 partikel/cel doorheen de laser gaat
- 2 belangrijke zaken zorgen ervoor dat cellen 1 voor 1 vloeien voorbij laser:
o Laminaire flow
o Hydrodynamische focussering
- Hydrodynamische focussering
o Doel = juiste oriëntatie van cel t.o.v. meetapparaat krijgen
Zorgt dat cellen 1 voor 1 aangestraald zullen
worden
o “Een hoog volume van het sample wordt in kleine
volume geforceerd in de flow cell”
Celsuspensie wordt “gespoten” in de
geleidingsvloeistof
Celsuspensie gaat in 1 rechte straal gaan
o Voorwaarde = laminaire stroom
Enkel als beide laminaire stroom hebben kan
je een vloeistof in een andere injecteren & gaan de vloeistoffen niet mengen
Wordt verkregen dankzij drukverschil in tube & tank
o Geleidingsvloeistof heeft grotere snelheid
Zorgt dat cellen 1 voor 1 zullen vloeien
Versnelt de suspensie -* partikels/cellen beperkt tot de centrale ruimte
- stroom laminair of turbulent? => getal van Reynolds:
o Formule: Re = d ρ v / η
d = diameter tube, ρ = vloeistofdensiteit, v = vloeistofsnelheid, η = viscositeit
o Bij Re < 2300 => laminaire stroom
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller biomed2017. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $0.00. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67096 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now