In 1A2 wordt er een VO 'enzymkinetiek' gegeven. In dit VO krijg je verschillende opdrachten die je samen met 2 andere studiegenoten maakt. De uitkomsten van deze opdrachten ga je in een essay verwerken. Dit essay moet voldoen aan de eisen van wetenschappelijk schrijven.
Fosfaat: een competitieve
remmer bij de alkalische fosfatase
activiteit
Voornaam Achternaam (studentennummer)
Samenvatting
De vraagstelling van dit onderzoek is of fosfaat als een competitieve of een non-competitieve
remmer werkt bij het remmen van de alkalische fosfatase activiteit. De probleemstelling bij deze
vraag is dat als fosfaat een non-competitieve remmer is, de enzymbepaling storend bevonden
wordt waardoor de alkalische fosfatase waarde onbetrouwbaar is.
Om dit te kunnen beslissen, wordt productievorming met en zonder de remmer bekeken bij
dezelfde hoeveelheid substraat. In een Lineweaver-Burk plot kan men de verschillen in de
Michaelis-Menten constanten (Km) en de maximale snelheden (Vmax) van de alkalische fosfatase
activiteit zien.
De gevonden meetwaarden van de productievorming met de remmer hebben een Km van 0,2
mmol/L en een Vmax van 140 nmol/min. De gevonden meetwaarden van de productievorming
zonder de remmer hebben een Km van 0,1 mM en een Vmax van 200 nmol/min.
Uit de resultaten wordt de conclusie getrokken dat de alkalische fosfatase activiteit wordt
geremd door een competitieve remmer. Hierdoor zal fosfaat de enzymbepaling niet storen, de
alkalische fosfatase waarde betrouwbaar houden en voor spectrofotometrische bepaling ervan
kunnen worden gebruikt.
Inleiding
Alkalische fosfatase (EC 3.1.3.1) is een enzym dat organische fosfaatesters hydrolyseert. Het in
humaan plasma aanwezige enzym is vooral afkomstig van lever- en galepitheel, en van
osteoblasten (1). De alkalische fosfatase activiteit in plasma is sterk verhoogd in patiënten met
cholestase door galwegobstructie, bij sommige leveraandoeningen en bepaalde
botstofwisselingsziekten. Meting van alkalische fosfatase activiteit in plasma heeft dan ook een
belangrijk rol in de diagnostiek van deze aandoeningen (1).
De spectrofotometrische bepaling van de alkalische fosfatase activiteit is gebaseerd op de
omzetting van het kleurloze p-nitrofenylfosfaat in het geelgekleurde p-nitrofenol. De bepaling
van de hoeveelheid aanwezig enzym vindt plaats onder Vmax condities, hetgeen voor een
Michaelis-Menten enzym betekent bij een substraatconcentratie van minimaal 10 maal de KM
(2). Fosfaat remt de activiteit van alkalische fosfatase, en de hoeveelheid fosfaat in serum
verschilt aanzienlijk van persoon tot persoon, en van patiënt tot patiënt. De vraag is of de
aanwezigheid van fosfaat in het serum de enzymbepaling zodanig stoort dat de alkalische
fosfatase waarde onbetrouwbaar wordt voor de diagnostiek. Dat is met name het geval als
fosfaat een non-competitieve remmer is van alkalische fosfatase. Het doel van dit experiment is
1
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller charlottehopmans2. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.34. You're not tied to anything after your purchase.
