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Apuntes Anatomía Patológica y Citodiagnóstico INMUNOHISTOQUIMICA
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Apuntes Anatomía Patológica y Citodiagnóstico INMNUNOHISTOQUIMICA
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NF6 part 2: Aplicación de técnicas Histoquímicas y Enzimohistoquímicas M051.FUNDAMENTOS, CONTROLES Y APLICACIONES DE LAS TÉCNICAS DE
HISTOQUÍMICA ENZIMÁTICA (HISTOENZIMOLOGÍA)
1.1 ¿Qué son las Técnicas de histoquímica enzimática? (Diapo58)
Enzima: moléculas orgánicas que actúan como catalizadores de reacciones químicas,
aceleran la velocidad de reacción.
➢ Técnicas para demostrar la presencia y actividad enzimática al reproducir la reacción
que se daría in vivo (control T, pH, presencia de cofactores (precursor de coenzimas)) ->
detecta enzimas.
➢ La técnica se aplica in situ (en el corte histológico).
➢ Durante la fijación: importante conservar la actividad enzimática ¿Cómo lo haremos?
1.Trabajar con material congelado sin fijación química. Evitar el formol.
2.Localizar dónde se produce la reacción al observarla en el microscopio al poner un
producto que reacciona con la reacción del sustrato (usan cromógenos que cambian las
condiciones fisicoquímicas debido a la reacción), haciéndose visibles.
➢ Está en desuso y cada vez se usa más la inmunohistoquímica y técnicas de patología
molecular.
El resultado de la técnica se verá:
- Opaco a la luz blanca, UV y haz de electrones
- En fluorescencia se verá luminiscente
1.2 Fundamento
Hay diferentes técnicas de sustrato, la más frecuente: técnica histoquímica de
acoplamiento: Intervienen dos reacciones químicas simultáneas y acopladas:
- 1a. Reacción de transformación enzimática del sustrato.
- 2a. Producción y precipitación del cromógeno.
4 elementos que intervienen en inmunohistoquímica enzimática:
1. Sustrato (sustancia sobre la que actúa una enzima).
2. Producto primario de la reacción (PPR): es el resultado de la reacción de la enzima
con el sustrato, actuando el PPR de acoplador de las dos reacciones químicas.
3. Precursor no coloreado: sustancia que después dará color.
4. Producto final de la reacción (PFR): compuesto coloreado que precipita, reacción entre
el producto primario y el producto coloreado.
Intervienen 2 reacciones químicas simultáneas y acopladas:
1a. Reacción de transformación enzimática del sustrato: La reacción de la enzima con
el sustrato da el Producto primario de la reacción (PPR) que actúa de acoplador entre la
primera y segunda reacción.
2a. Producción y precipitación del cromógeno: Uso del precursor no coloreado -> suele
ser una sal de diazonio.» Sal diazonio + PPR = compuesto azoico (-N=N-) coloreado (PFR).
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