Labo Verslag biochemie of biotechnologie eiwitzuivering: zuivering van invertase
10 views 0 purchase
Course
Biochemie
Institution
Karel De Grote-Hogeschool (KdG)
Labo verslag voor het vak biotechnologie of biochemie.
Bevat 25 pagina's
Inleiding, procedure, oplossingen, Resultaten en besprekingen, besluit, antwoord op een vraagstuk en referentielijst
Goed geschreven en overzichtelijk opgebouwd met duidelijke illustraties en schema's
2. Procedure.................................................................................................. 4
2.1 Bereiding van het ruwe extract.................................................................................4
2.2 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie.......................................................4
2.3 Bepaling van de efficiëntie van de zuiveringsstap....................................................4
2.3.1 Bepaling van de enzymatische activiteit............................................................4
2.3.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry...............................................8
2.4 Bepaling van de zuiveringsfactor en het % recovery..............................................10
2.4.1 Bepaling van zuiveringsfactor..........................................................................10
2.4.2 Bepaling van % recovery..................................................................................11
3. Oplossingen............................................................................................. 12
3.1 GHS......................................................................................................................... 12
3.2 Oplossingen bereiden.............................................................................................14
4.1 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie (Äkta Start)..................................18
4.2 Bepaling van de efficëntie van de zuiveringsstap...................................................18
4.2.1 Bepaling van de enzymatische activiteit..........................................................18
4.2.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry.............................................23
4.3 Bepaling van de zuiveringsfactor en % recovery....................................................24
4.3.1 Zuiveringsfactor............................................................................................... 24
4.3.2 % Recovery...................................................................................................... 26
Eiwitzuivering: isolatie en
partiële zuivering van invertase
Dit verslag gaat over proef 6: Eiwitzuivering. De proef bestaat uit 4
verschillende delen. Alle aspecten worden hieronder één voor één
behandeld.
1. Inleiding
Invertase is een enzym dat de omzetting van sacharose (sucrose) tot
glucose én fructose (invertsuiker) katalyseert.
Figuur 1: Reactie invertase
Invertase kan men o.a. vinden in een mengsel dat men verkrijgt na het
autolyseren van gistcellen. Om dit invertase te isoleren uit het ruwe
invertase-extract (supernatans), worden er gepaste scheidingstechnieken
en zuiveringsstappen toegepast. Tijdens deze scheiding moet er rekening
gehouden worden met een zo hoog mogelijke zuiveringsgraad en een zo
min mogelijk verlies van het enzym (% recovery).
Om de parameters % recovery en zuiveringsgraad te bepalen, moeten er
zowel voor als na de zuiveringsstappen de nodige testen uitgevoerd
worden om de enzymatische activiteit en het proteïnegehalte van het
enzym te achterhalen.
1.1 Doel
Het doel van deze proef bestaat uit vier stappen.
In het eerste deel van de proef wordt invertase geïsoleerd uit gisten door
de autolyse van cellen. Zo verkrijgt men het ruwe invertase-extract. Dit is
het staal dat men zal onderzoeken.
In het tweede deel van de proef wordt het ruwe invertase-extract
gezuiverd. Hierbij hanteert men een scheidingsmethode, namelijk
gelfiltratie. Gelfiltratie is een techniek waarbij grote deeltjes worden
gescheiden van kleine deeltjes. De grote deeltjes zullen eerder elueren
dan de kleinere. Om de gelfiltratie te verwezenlijken, wordt er gebruik
gemaakt van het toestel Äkta Start (Cytiva).
In het derde deel van de proef wordt de efficiëntie van de zuiveringsstap
(=gelfiltratie) bepaald. Dit wordt gedaan door enerzijds de enzymatische
activiteit te bepalen en anderzijds het proteïnegehalte te bepalen volgens
Lowry. Om de enzymatische activiteit te bepalen, gebruikt men een kit,
namelijk de Invertase Assay Kit (MAK-118; Sigma Aldrich). Indien deze
2
, 3CB 04/10/2021
twee bepalingen zijn gedaan, kan er iets gezegd worden over de efficiëntie
van de zuiveringsstap.
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller antonmartens. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $12.20. You're not tied to anything after your purchase.
