Summary
Samenvatting Les 5/6 van Biotechnologie
- Course
- Institution
Samenvatting van les 5 van biotechnologie van de slides, met eigen notities.
[Show more]
Seller
Follow
VDSA
Reviews received
Content preview
Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodiesOpwarming: Ab, fragmenten en equivalente moleculen
Ab en hun derivaten
- 150 kDa: 4 polypeptiden van 2 genen met 2 zware en 2 lichte ketens
assembleren in gastheer tot een IgG van volledige lengte.
- Sterkte antigenbinding = functie van variabele domeinen in terminale
fragment.
IgG expressie
- Individuele peptiden kunnen tot expressie gebracht worden in E. Coli.
o Niet geglycosyleerd
o Verminderde omgeving van cytoplasma stopt assemblage
Ze kunnen op zichzelf vouwen maar Cys-bruggen nodig tussen EW om te
assembleren tot de correcte structuur: cytoplasma E. Coli daar niet
bevorderlijk voor
o Zonder assemblage zijn EW niet stabiel makkelijk aggregeren
- Bij voorkeur: eukaryote gastheer = gist of hybridoma’s / welke Ab chassis.
o Ab (full length) van volledige lengte, chaperones nodig om te vouwen en
glycosylering voor functie: eukaryote gastheer kan beiden bieden.
o Chassis = Ab-ruggengraat (muis, chimeeer, gehumaniseerd en menselijk): centraal
onderdeel in fabricageproces beschrijven waaraan u nog onderdelen toevoegt.
Menselijk = minst immunogeen
Gehumaniseerd: minste aanpassingen of optimalisatie voor therapeutica.
Muis mAb: therapeutisch of diagnostisch
Immunogeniciteit van muis Ab verminderen:
o Fv overbrengen naar gehumaniseerde chassis chimeer Ab
o Alleen CDR-lussen, die direct contact maken met antigen,
overbrengen naar gehumaniseerde chassis.
IgG fragmenten
- Levensvatbaar biotherapeuticum zolang de antigen binding behouden blijft
- Geen volledige IgG nodig voor functie: zolang Fv behouden blijft en binding mogelijk is, kan
dit molecule gebruikt worden voor functie.
o Humaan Ab of gehumaniseerde chassis: 2 fragmenten/ketens voor een volledig Fv,
dus dAbs niet optimaal
Andere natuurlijke Ab-structuren
- Haaien-Ab en kameelachtigen-Ab: binden met hoge affiniteit vanuit een enkel domein (scFv).
o Top of IgG equivalent: geen dubbele keten voor binding maar singel domein capabel
voor het bereiken van de hoge affiniteit, hetzelfde een humaan Ab zou bereiken.
- Fragmenten daarvan kunnen ook gebruikt worden:
o Nanobodies = kameelachtig singel dAbs (kleiner dan scFv): VHH-domein.
,Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodies
EW ontworpen voor binding
- Patroon voor succesvolle EW = lage immunogeniciteit.
- Patroon in hun ontwikkeling = gerichte evolutie
- Toepassingen gaan verder dan biotherapeutica
o Diagnostische reagentia = ELISA
o Biotechnologische toepassingen = EW-zuivering, verbeterde PCR
o Onderzoeksmiddelen = Ab-fluorescerende EW-fusies
o Bioremediatie = metaalbindende peptiden
, Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodies
EW productie in andere gastheren
Relevante gastheren voor op grote schaal EW-expressie
Sterktes Limitaties
Prokaryoten - Makkelijk manipuleren (incl: - Minimale post-
- E. coli ontwikkelen) translatie modificatie
- Grote schaal fermentatie (PTM)
- Eenvoudige en goedkope grondstof - Laagste ondersteuning
- Hoge opbrengt (yield) voor EW-vorming
Gisten - Makkelijk manipuleren - PTM kan anders zijn
- Pichia pastoris - Grote schaal fermentatie bij de mens
- Hoge opbrengst
Mammalia cel - Alle PTM beschikbaar - Trage groei
- CHO = chinese - Kan groeien in suspensie - Moeilijk opschalen
hamster ovary - Duur
- Afhankelijk van serum
Vereisten voor EW-expressie in nieuwe gastheer
- Methode om gastheer te transformeren.
o Waar DNA in gastheer inbrengen is niet gegeven
Bacterie: geslachtsgebonden elektroporatie in staat om DNA in cel af te
geven inefficiënt voor complexere cellen owv celwanden = algen,
plantencellen.
- Geschikte vector: stabiel
o Plasmide (E. Coli): maar zijn niet allemaal stabiel
o Shuttle vector = plasmide dat groeit: bezit alles om te groeien in een andere gastheer
- Selectiemarkering
o Kan gebruikt worden in de gastheer die je transformeert
o Bij shuttle vector: werkt op origineel organisme en
bestemmingsorganisme.
- Bekende onderdelen (promotor, RBS, terminator)
pRS
= diverse en meest populaire familie van shuttle-plasmiden voor E. Coli en gist.
- Gist: shuttle vector = deel van sequentie voor replicatie van bacteriën en
ander deel van sequentie voor replicatie van gisten.
- Strategie om vectoren te creëeren waar je efficiënt in E. Coli kan werken en dan verplaatsen
naar productie streng (=gist).
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller VDSA. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.04. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
52510 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now