Samenvatting
Samenvatting les 2/6 van biotechnologie
- Vak
- Instelling
Samenvatting van les 2 van biotechnologie obv notities van slides. Zeer volledig en geslaagd vanaf de eerste keer.
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 15 pagina's
Voorbeeld 2 van de 15 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
Verkoper
Volgen
VDSA
Ontvangen beoordelingen
Voorbeeld van de inhoud
Biotechnologie Les 2: From gene to proteinRecap
Als je P en H gebruikt heb je 2 opties problemen.
Restrict X en P: overhangs niet compatibel
ongewoon om iets te binden, anders dan originele site.
Zelfde restrictie in destination vector, maar deze keer met behoud van de vector zelf ipv fragment.
Fragment isoleren van source vector en backbone van destination vector samen zetten en
opnieuw ligeren.
pUC systeem
= circulair, bacterieel plasmide (gebruikt voor klonen)
- Gegenereerd met klassieke methode
- Meerder cloning sites (MCS) binnen LacZα reporter.
- Hoog aantal kopieën (80-300 kopieën per cel)
o Plasmiden: hoeveel kopieën van plasmide per individuele cel
Ori = origin of replication = levensvatbaar blijven
ApR = antibiotic resistance marker
Alles wat je in reporter kloont zal gen onderbreken gen werkt niet meer.
Klonen: gen van interesse toegevoegd aan vector, dit te versterken
Biobrick systeem
Output van assemblage kan input zijn van volgende assemblage.
X- en S-overhangen cut-and-ligate vernietiging beide endonuclease restrictie-plaatsen SCAR =
kan door geen van beide enzymen aangevallen worden
- Limiet van kracht van biobrick
Verschil biobrick clonen en klassiek moleculair clonen?
- Beiden = orthodox type II endonuclease: cut in planidromische herkenningsplaats.
- Verschil in design, wel zelfde gebruik van enzymen.
o Klassiek = vertrouwt op bestaand cut-sites en aangepast om individuele problemen
op te lossen.
o Biobrick creëerde een standaard (standaardcontext van enzymen om optimalisatie
en reproduceerbaarheid te verbeteren, standaardwerkwijze om
reproduceerbaarheid te verbeteren en kost te verlagen,…)
, Biotechnologie Les 2: From gene to protein
PCR
DNA polymerase
= synthese DNA via RNA
- Templaat-afhankelijke DNA synthese
o Replicatie
o Repair (herstellen)
o Reverse transcriptie
- 7 familie door homologie
o Gemeenschappelijk mechanisme
o Gemeenschappelijke structurele elementen en algehele topologie
Rechterhand
Palm subdomein: meest geconserveerde structuur tussen polymerasen
o Familie specifieke domeinen
= controleert snelheid van nucleotide incorporatie
= houdt duplex vast
= controleert of DNA in actieve site blijft of verplaatst naar
additionele domeinen
covid = RNA virus: converteren naar DNA (reverse transcriptase) + amplificeren (replicatie).
Algemeen polymerase
- Natuurlijke polymerasen afhankelijk van triP als geactiveerde monomeren.
- Precieze katalytische site geometrie activering 3’-OH nucleofiele aanval op α-P.
- Pyrofosfaat (βγ) worden afgevoerd = leaving groep opgesliptst in 2 fosfaten.
A-familie DNA-polymerase B-familie DNA-polymerase
Biologische functie Biologische functie
- Replicatie (T7-faag) - Replicatie (T4 en phi29 fagen, gist)
- Reparatie en verwerking Okazaki- - Reparatie (E. Coli)
fragmenten (E. Coli Pol I)
Thermus aquaticus DNA polymerase I = Taq Pyrococcus furiosus DNA polymerase (Pfu)
- Werkpaard voor moleculaire biologie - T1/2 > 1h bij 97,5°C (thermostabielere)
- T1/2 = 1,5min bij 97,5°C (thermostabiel: - 6,5 incorporaties per binding event
voor biotechnologie) (lagere DNA-aff)
- 22 incorporaties per binding event - Error rate: 3 x 10-5 per base
(hoge DNA-aff: eraf en herbinden) (betrouwbaarder)
- Error rate: 3 x 10-4 per base = hoge - Detectie limiet: 100 kopieën
betrouwbaarheid - 3’ 5’ exonuclease = proofreading
- In staat: single templates detecteren - Blund end
(hoge DNA-aff: forensisch)
- 5’ 3’ exonuclease
- Laat 3’A overhang achter (of G)
DNA polymerase 5’ 3’ // 3’ 5’ exonuclease omgekeerde richting van synthese: foutencorrectie.
5’ 3’ exonuclease: geen DNA foutencorrectie maar blokkade: alles voor DNA polymerase vernietig.
Exonuclease = werkt als nuclease (hydrolyse DNA bij overbruggende P) vanaf uiteinden.
Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:
Bewezen kwaliteit door reviews
Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!
In een paar klikken geregeld
Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.
Focus op de essentie
Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper VDSA. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor $8.39. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 65040 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen
Laatst bekeken door jou
Tentamen (uitwerkingen) ·
OPH105 QUIZ 1 CVF, EOMs & Pupils
Samenvatting ·
Beroepsgerelateerde Wetgeving II
Tentamen (uitwerkingen) ·
Colorado MPJE Already Verified Answers
Overig ·
NR 500NP Week 2 Reflection On Learning
Tentamen (uitwerkingen) ·
Ultimate RICA Study Tool CalStateTEACH
Tentamen (uitwerkingen) ·
music Questions with complete solution
Tentamen (uitwerkingen) ·
BUAD 331 Quiz 5 Questions 100% Accurate!
Samenvatting ·
Kredietbemiddeling, module 1 en 2
