Summary
Samenvatting Hoofstuk 1: Histologische technieken
- Course
- Institution
Samenvatting weefsels hoofstuk 1 bevat zowel de ppt als wat er gezegd is tijdens werkcollege
[Show more]
Seller
Follow
merelgeerts2
Content preview
Histologische technieken Doel: weefsels en organen observeerbaar maken voor lichtmicroscoop (LM) en elektronen
microscoop (EM)
Probleem:
weinig contrast in biologisch materiaal, grijsachtige kleuren
weinig licht (elektronen) doorlatend, te dik
Methodes:
1) Fixatie
2) Inbedden
3) Snijden
4) Kleuren of contrasteren
1. Fixeren
doden van weefsel op een manier dat de structuur behouden blijft
Bewaren van weefsels met behoud van oorspronkelijke structuur = denatureren van eiwitten =>
stilleggen van bacteriële en autolytische afbraakreacties
3D structuur eiwitverbreken = werking stil
Permeabiliseren van celmembraan
weefsel bestaat uit cellen, gaatjes maken daarin zodat fixatief er in kan (ook kleurstoffen kunnen
binnendringen)
Harder en poreuzer maken van het weefsel
van zacht weefsel kunnen geen dunne sneetjes gemaakt worden
door poreuzer kunnen kleuren binnendringen
Hoe:
Chemische fixatie: immersie (onderdompelen in fixatief) of perfusie (fixatief inspuiten) van het
weefsel met een fixatief
Vb. ethanol, azijnzuur, glutaaraldehyde, osmiumtetraoxide, formaldehyde
precitiperend fixatief: eiwitten neerslaan (alcoholen)
groslinkend fixatief: eiwitten aan elkaar vastzitten (werking stil) (formaldehyde)
Koude fixatie: invriezen van weefsel
vorm minder goed dan chemische fixatie
! Artefacten: veranderingen die tijdens fixatie in weefsel ontstaan en afkijken van de in vivo situatie
2. Inbedden
Het gefixeerde materiaal omwikkelen en doorbrengen met een inbedmiddel
Inbedmiddel:
Substantie die in het weefsel indringt
Substantie die hard wordt
Materiaal snijdbaar in dunne plakken (coupes)
Paraffine (LM), hars en plastic (EM)
komen eerst voor in vloeibare toestand, kunnen rond materiaal en binnen gaan, worden hard
Inbedmiddelen: hydrofoob – bevat veel water (paraffine mengt niet met water, weghalen)
Eerst weefsel ontwateren: weefsel in stijgende (concentratie) reeks alcoholbaden brengen:
30°, 50°, 70°, 90° en absolute alcohol
‘clearing’ in tolueen (oplosmiddel): mengbaar met alcohol en het inbedmiddel
, 3. Snijden
Door de hardheid van inbedmateriaal: snijdbaar in dunne plakken
Paraffine: 5µm (1-20µm) doorlaatbaar voor licht, LM
Microtoom met stalen mes
Hars, plastics:
50nm – 2µm: halfdunne coupes, LM
Microtoom met glazen mes (meer details dan paraffine)
70nm (60-100nm) doorlaatbaar voor elektronen, EM
Microtoom met glas- of diamantmes
4. Kleuren – lichtmicroscopie
4.1. Helderveld-LM = bright field LM
Wit licht: spectrum golflengtes (380-720nm) kleurverschillen ontstaan door verschillen in
lichtabsorptie
Contrast in coupes laag => visualisatie van cel bestanddelen en extracellulair materiaal in het
weefsel door te kleuren
Kleurstoffen: waterige oplossingen (vaak)
Zure, basische en indifferente kleurstoffen
Coupes worden eerst gedeparaffineerd (tolueen)
want water zal afgestoot worden anders door paraffine
eosine vaak gebruikt, rood om duidelijk te zien waar aangebracht
4.2. Zure en basische kleurstoffen
Routine histologische kleuring: Haematoxyline (base, blauw) – Eosine (zuur, roos) (HE)
Gebaseerd op differentiële aanwezigheid van zure (-) en basische (+) weefselbestanden
(na denaturatie)
Vb. kern: veel zure groepen, cytoplasma: veel basische groepen
Zure groep: H+ ionen afgeven
Vb. COOH in eiwitten
HPO4 in DNA en RNA
H2SO4 in cytoglycanen
Basische groep: H+ ionen opnemen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller merelgeerts2. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.28. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67447 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now