Bachelor In De Biomedische Laboratoriumtechnologie
Immunologie
Summary
Samenvatting verslag van elektroforese
0 purchase
Course
Immunologie
Institution
Odisee Hogeschool (Odisee)
Het is makkelijker om je te focussen op de dingen die echt noodzakelijk zijn. Met dit document lukt dit dus! Maak tijd vrij en haal mooie punten. Met dit document haalde ik zeker een 17 dus succes is verzekerd!
Bachelor In De Biomedische Laboratoriumtechnologie
Immunologie
All documents for this subject (8)
Seller
Follow
bregjevanlanduyt
Content preview
Naam: Bregje Vanlanduyt Jaar: 2022-2023
Klas: 1BTLA
Elektroforetische scheiding van serumeiwitten volgens het systeem van
HELENA
Doel: In groepjes van 4 of 5 een succesvolle elektroforese volgens het systeem van HELENA
uitvoeren. Hierna een correct besluit vormen over de uitkomsten van de elektroforese.
Principe: Elektroforese is een natuurlijk proces waarbij geladen deeltjes door een
medium bewegen onder invloed van een elektrisch veld. Bij elektroforese wordt
gebruik gemaakt van het feit dat eiwitten in oplossing een bepaalde lading hebben
Dit betekend dat de eiwitten gescheiden worden op basis van hun lading en grootte.
Ook bewegen de geladen deeltjes op een vaste drager (cellulose-acetaat). (Goethals,
Lenvain, & Persijn, 2022)
Daarnaast is het iso-elektrische punt (pI) van een eiwit ook een zeer belangrijk iets bij
elektroforese. Dit punt toont de pH-waarde waarbij het eiwit geen netto elektrische waarde
draagt. De lading van de eiwitten is de resultante van alle geladen aminozuurzijketens die
het eiwit bevat. Het iso-elektrisch punt van gangbare eiwitten ligt tussen pH 1 en 10.
Aminozuren zijn zwakke zuren en kunnen worden omgeladen door een overmaat aan H+
of OH- in het oplosmiddel. Of een eiwit positief dan wel negatief geladen is, hangt dus af
van de pH van de buffer waarin het is opgelost. (Goethals, Lenvain, & Persijn, 2022)
pH = pI --> netto lading eiwit neutraal
pH > pI --> netto lading eiwit negatief
pH < pI--> netto lading eiwit positief
Enkele factoren kunnen de snelheid van migratie beïnvloeden: pH van de buffer,
ionensterkte van de buffer, spanning en stroomsterkte en elektro-endosmosis.
1. pH van de buffer
Verschillende eiwitten hebben bij pH 8,8 een verschillende netto-lading en een
verschillende grootte, waardoor de migratie met verschillende snelheden naar de
anode gebeurt.
, (Goethals, Lenvain, & Persijn, 2022)
2. Ionensterkte van de buffer
De ionensterkte is de concentratie aan ionen in de oplossing. Hoe hoger de
ionensterkte hoe lager de bewegelijkheid en omgekeerd. Er is dus in invloed op de
snelheid van de verplaatsing. Wanneer de ionsterkte verhoogd zorgt dit voor
weerstand waardoor er ook een opwarming kan ontstaan. Wanneer de ionensterkte
stijgt zorgt dit voor verdamping waardoor er een kans is op denaturatie van de
eiwitten
(Goethals, Lenvain, & Persijn, 2022)
3. Spanning en stroomsterkte
Hoe hoger de spanning, hoe hoger de migratiesnelheid en hoe hoger de
temperatuur. Dit kan weer leiden tot denatureren van eiwitten.
(Goethals, Lenvain, & Persijn, 2022)
4. Elektro-endosmosis
Cellulose acetaat bezit polaire groepen die negatief opgeladen worden wanneer ze
onderworpen zijn aan een potentiaalverschil. Deze negatief geladen groepen hebben
de neiging om naar de anode te migreren, maar ze hangen vast aan de matrix en
kunnen in feite niet bewegen. Als reactie hierop ontstaat er een bufferstroom in de
tegenovergestelde richting, dus richting de kathode.
(Goethals, Lenvain, & Persijn, 2022)
Benodigdheden:
- Droogstoof: Heraeus
- Stroombron: Consort
- Micropipet: gilson L328-068
- Elektroforese kamer: M216-007
- Cellulose-acetaatstrip: HELENA
- Onbekend serum: 1
2
5
8
9 (hierover wordt bespreking gemaakt)
In volgorde op strip
- Reagentia
o HR-buffer: inhoud van één zakje oplossen in 750 ml gedestilleerd water. (pH
= 8,8 ; μ = 0,07)
o Kleurstof: (Ponceau S) los 500mg op in 100 ml 5% trichloorazijnzuur in water
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller bregjevanlanduyt. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.79. You're not tied to anything after your purchase.
