Summary
BV05MBT samenvatting
- Course
- Institution
Dit document bevat een uitgebreide samenvatting van de tentamenstof van BV05MBT. Alle leerdoelen worden behandeld in dit document.
[Show more]
Seller
Follow
felianne_2000
Content preview
Samenvatting MBT, Sarnen vatting MBT
PCR stappen :
Jenaturatie : ( by ca .
95°C )
De DNA template women
-
DNA
2
Strengen Van net Los
Annealing :( by Ca so -
65°C )
afhanuelyu
-
Annealing temperature Van de primers
-
In deice stop binder de primers aan het DNA .
Ex tense / Elongate :C 72°C )
by
Polymerase
-
de primers maauteo het
uerlengt en een DNA sequentle complemental r aan
template DNA .
DNA Replicate in de cel :
door diverse Zoals Helicase
DNA
gerepliceerd
°
wordt in vivo enzymes : .
Primase en
Polymerase .
De DNA Replicate Vindt
op de leading lagging strand
°
plaats en
' '
°
De 5 3
een
verloopt van naar en
de ander d. m.ir .
Ouaeaui
fragment en
Richt Van Replicate
ing
:
DNA door
aangemaaht
°
wordt
polymerase .
dit
enzym beweegt
het
'
over DNA van 3 naar 5 ,
Maar
synthetiseerd 3:
'
Van 5 naar
Verschillen Replicate ( Vitro ) Vs PCR ( vitro ) :
Replicate PCR
°
RNA primers °
Artifkléle DNA
primers
Helicase ( 's )
Oligo
0
°
37°C + Pola °
gboc
Pol
72°C met
tag
°
, PCR
Program ma :
stop 0 Denaturatie
96°C 5- 10min
Stop 1 Denaturation
96°C 15s -
30s
Strap -65°C her halen
2
Annealing 50 15s 30s 30 40 beer
-
-
strap 3 Ex tense 72 °C 30s
-
5min
Stop DNA 72°C 10min
4
syntheses
Annealing ( Hybridisation primer ) :
By -65°C de
annealing temp ( Ta ) afhanuelyu de
°
Ca ideate Van
. 50 .
waarby is
smelt temperature
0
De smelt temperature wordt bereuend door voor alle A ent ,
2°C te teller
en voor eine Gen C . 4°C
°
Om TA te Fwd Tm
de
juste nemen ,
wordt voor RU en primer de bereuend ,
herby
wordt 5°C Tm TA
Laagste gehaald
→
er Van de Dit wordt
je
eleutroforese
Analyse via
Agarose gel :
By eleutroforese wordt het DNA
gescheden op basis Van Grootte
°
agarose gel
een .
hanalen Porién Waardoor het DNA
Ago han
°
3- dimension ace structuur
gel een
rose is met en
grater het Template DNA des te langzamer
Hoe het door die
migreren ☐ .
us
porién en hanalen
gaat .
primer Design :
°
Primers
Zyn Oligonucleotide Complement air n .
aan de 3
'
uiteinde Van
je Template .
De 2
primers ,
Forward ( Fwd ) en Reversed CRVS) net de dubbele
Streng
,
zijn start punt voor
polymerase om
te
syntnetiseren .
°
Om een stun template te
vermenigvuldigen Zyn er
template speafieue primers nodig ,
deee
hand Primer
On twerp
je aan de Van de
design regeis :
*
Primer nucleotiden
lengte van 17 28
-
AT 's
Percentage GC 's
*
Gc tussen 60% template
40 redelyugelyuverdeeld over
-
,
en
*
'
3 end Van de met G of C
primer eindigd
* Zeit annealing
Voor nom →
complementare sequentles
* ( Tm )
Smelttemperatuur -65°C 5°C
tussen so .
primers mogen niet meerdan cut eluaar
tigger .
, Sarnen
vatting kloneren WC 3
Waaromkloneren ?
°
hloneren het DNA daar het te doer :
is manipuleren van on
volgende mee
*
Eiwit hoeueelheden produceren ( coals insulin e)
in
grote
*
Function van of onderzoeuen
genen
☐ omeinen van
genen
*
Effect van mutant en bestuderen
gen
( GFP fluorescent remanent
*
Ondereoeuen wanneer een promoter actief is
kloneer stappen :
Digest
0
ie :
DNA Cplasmide of template) met Restrict ie (RE ) hnippen Restriction enzymen
-
enzymen .
Verbreuen de Suther fosfaat teeter RE hebben does
eigenlyu defunct ie om DNA
-
,
te Knipper op speafieue sequentles en
vervolgends te lineariseren .
RE (Reversed complementair )
-
hnippen op palingdromen
Knip warranties :
RE 's
zijn te under Variates
•
in 2 :
-
sticky end / Bland
-
ends
⑥pµgµ/pµ@
Type Restrict ie
enzymen
:
°
lsoschizomeren Heruennen dezelfde
:
sequentIes
( Restrict ie sites)
Neoschizomeren : Herhennendeeelfde Anders
sequentles Maar unippen
0
,
Isocaudomeren Herhennen dezelfde
sequent es
°
:
Verschillende / ,
Maar
geuen
Sticky -
ends
Digest /e :
lean met 1 of 2
Digest ie
°
restrict ie
enzymen Worden
uitgeuoerd
Digest /e met 1 RE : Uan
Lyden tot zeif
ligate uan de plasmide of het insert is
°
Verwoerd de
in plasmid geligeerd .
Digest RE
Geeftgeen Zelf ligate
°
met 2 insert lean op 1
:
ie en Maar manier
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller felianne_2000. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.14. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
79202 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now