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manual de inmunologia
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manual de inmunologia para las oposiciones de laboratorio
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Técnicase in unodiaqnó stico
Capítulo 57. Aplicación de técnicas basadas en reacciones antígeno-anticuerpo secundarias
Capítulo 58. Aplicación de técnicas basadas en reacciones antígeno-anticuerpo primarias
Capítulo 59. Detección de anticuerpos
Capítulo 60. Aplicación de técnicas de estudio de hipersensibilidad
Capítulo 61. Aplicación de técnicas de identificaci ón de poblaciones celulares por citometría de flujo
Capítulo 62. Valoración de la funcionalidad de la inmunidad celular
Capítulo 63. Aplicación de estudios de tipificación de antígeno leucocitario humano
, ,
Indice de contenidos
• Introd ucción
• Técnicas de aglutinación
• Técnicas de preci pitación en gel
Técnicas de precipitación en medio líquido
• Técnicas de fijación del complemento
• Diagnóstico y seguimiento serológico de las enfermedades infecciosas
, de técnicas
anticuerpo se
e INTRODUCCIÓ
Las técnicas inmunoquímicas y los inmunoanálisis utilizan las reacciones inmuno- • Sistema inmunitario
lógicas antígeno-anticuerpo. Los antígenos son sustancias capaces de estimular el sis- • Inmunodiagnóstico
tema inmunitario y originar una respuesta dirigida específicamente contra ellos. Se • InmunogLobulina
• Antígeno
denomina epítopo al determinante antigénico que reconoce y al que se une el anti-
• Anticuerpo
cuerpo. Un mismo antígeno puede tener varios epítopos. Los anticuerpos pertenecen
a un grupo de proteínas llamadas inmunoglobulinas (Ig), que son glucoproteínas que
producen los linfocitos B y las células plasmáticas, que se combinan específicamente
con los antígenos mediante los dos centros de unión que poseen.
Cuando se ponen en contacto un antígeno y un anticuerpo específico contra él,
reaccionan entre sí y se obtiene un complejo antígeno-anticuerpo, mediante una
unión reversible con una constante de equilibrio característica. En la interacción in
vitro de un antígeno con su correspondiente anticuerpo se distinguen dos etapas: la
reacción primaria no visible y la reacción secundaria, que sigue a la anterior y se
caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como, por ejemplo, la aglutinación
o la precipitación. Los complejos iniciales que se forman rápidamente, sobre los que
(dentro de unos límites) las variaciones de temperatura y concentración salina tienen
poca influencia, se agregan después para producir diferentes fenómenos visibles, cuyas
características dependen en gran parte del antígeno. Esta etapa se acelera con la tem-
La reacción antígeno-anticuerpo
peratura, la agitación y es electrolitodependiente.
desencadena una reacción pri-
En la unión antígeno-anticuerpo influyen principalmente dos aspectos: la afini-
maria y una secundaria.
dad, magnitud termodinámica que señala la energía de interacción de un lugar de
combinación del anticuerpo y su epítopo correspondiente del antígeno; y la avidez,
que define la fuerza global de la unión entre el antígeno y el anticuerpo y com-
prende la suma de las afinidades de unión de todos los lugares individuales de
combinación del anticuerpo. La afinidad es una propiedad del antígeno y la avidez
lo es de su anticuerpo.
En esta unión intervienen asimismo factores como el pH del medio, la tempera-
tura y la fuerza iónica del medio. No obstante, la variable más importante es la
concentración relativa de ambos componentes; cuando la concentración del antí-
geno presente en la reacción es pequeña en relación a la de anticuerpo, todos los
epítopos están ocupados, pero no ocurre así con los centros de unión de los anti-
cuerpos, de modo que no se forma una unión cruzada entre todos los componentes
y los agregados que se conforman son pequeños y solubles, originándose un preci-
pitado escaso, al contrario que en el sobrenadante, donde se acumula un exceso de La unión antígeno-anticuerpo
anticuerpo libre. Cuando las concentraciones de ambos son adecuadas, se ocupan los está mediada por la afinidad y la
dos centros de unión del anticuerpo, lo que da lugar a inmunocomplejos grandes e avidez.
insolubles 'que ocasionan que el precipitado que se forma sea máximo y no se detecten
anticuerpos o antígenos libres en el sobrenadante. Esta situación determina la razón
óptima entre las concentraciones de antígeno y anticuerpo para formar un inmuno-
precipitado en una reacción específica y en unas condiciones determinadas.
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, ~ Figura 57-1. Curva de precipitación de
reacciones antígeno-anticuerpo [Ag-Acl.
Zona de equiv aléncia
o
«
b
«(f)
o
"(i)
Q.
E
o Zona de exceso
o
(1) de antígeno
""O
e
'o
"o
~
"o..
"o
(1)
eL
Concentración de antígeno
Por último, cuando la concentración de antígeno es alta en relación a la de anti -
cuerpo, se originan agregados más solubles, por lo que el precipitado también es escaso
y en el sobrenadante existe gran cantidad de antígeno libre. La zona óptima de reac-
ción se denomina zona de equivalencia y se corresponde con concentraciones de
antígeno y anticuerpo equivalentes. En cambio, en las zonas con exceso de antígeno o
La zona de equivalencia es la anticuerpo, la reacción de precipitación está inhibida, y se produce una situación
zona óptima de reacción. conocida como fenómeno zona o prozona (Fig. 57 -1).
En la mayoría de los casos, se emplea el inmunoanálisis para la detección de
antígenos, por lo que los anticuerpos son el reactivo fundamental en este proceso.
Inicialmente se empleaban anticuerpos policlonales, obtenidos a partir de antígenos
con varios epítopos, que generan anticuerpos frente a cada uno de los epítopos. De
esa manera se obtiene una mezcla de anticuerpos que reaccionan frente a diferentes
determinantes antigénicos. El descubrimiento de los anticuerpos monoclonales ha
sido fundamental en el campo de las técnicas inmunológicas; estos anticuerpos se
obtienen a partir de linfocitos B sensibilizados frente a un determinado antígeno, que
dan lugar a hibridomas que producen anticuerpos específicos contra ese antígeno.
La formación de complejo s antígeno-anticuerpo se pone de manifiesto cuando tiene
lugar la etapa secundaria del proceso, que origina la presentación de partículas fácilmente
visibles. Estas partículas pueden visualizarse mediante diversas técnicas de laboratorio,
que difieren en cuanto a medios en los que se desarrolla la reacción, los soportes de los
elementos que intervienen, los métodos de visualización, otro s elementos coadyuvantes
de la reacción, etc., pero toda s ellas tienen en com ún la base de la reacción entre un
antígeno y su anticuerpo específico y la formación de un complejo antígeno-anticuerpo
que da lugar a moléculas lo suficientemente grandes para visualizarse fácilmente.
TÉCNICAS DE AGLUTINACiÓN
La aglutinación es una reacción inmunoquímica que produce la agregación de
Vídeo 57-1. Reali zación de una células o partículas recubiertas con antígenos o anticuerpos. Cuando el antígeno está
técnica de aglut inación. unido a un corpúsculo (com o bacterias, células sanguíneas o partículas inertes), la
reacción produce directamente aglutinación. La reacción de aglutinación tiene lugar
en dos fases: en la primera, se produce una rápida interacción entre el anticuerpo y el
antígeno sobre la superficie de la célula o partícula y, en segundo lugar, las partículas
se agregan y se produce la aglutinación (Fig. 57-2).
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