In deze samenvatting is de lesstof van het vak HPLC & GC beschreven. De informatie is overzichtelijk weggezet, dus alles wat bij GC hoort op een pagina en alles wat bij HPLC hoort op een pagina. Er is een pagina over monstervoorbewerking, eluenskeuze en van Deemter. De laatste pagina bevat de formu...
GC
De injectienaald is spits zodat het door de vials kan. De naald
komt eerst langs de septum (elastisch materiaal dat tegen
hoger temperaturen kan). Zowel de injector als kolom
hebben een hoge temp. Injecteren kan splitless of met split
gebeuren. Bij splitless komt de gehele injectie op de kolom
(doe dit bij lage concentraties). Bij injecteren met split komt
er maar een deel op de kolom (om fronting te voorkomen).
Wanneer de split 20:1 is, zal van 1/20 van de injectie op de
kolom komen. Om de splitflow hierbij te berekenen, doe je
de flow maal de noemer, dus bijvoorbeeld: 20 x 2 ml/min =
40 mL/min. Ook bestaat er een pyrolyse injectiesysteem
waarbij het sample volledig wordt afgebroken door een
temperatuur van 600-1000 graden (voor verf etc).
Scheiding bij de GC wordt gedaan op basis van
kookpunt. In de kolom zit de stationaire fase
aan de wand (capillair). Meestal is deze polair en
de mobiele fase apolair, maar bij de reversed
phase is dit andersom. De dikte van de
stationaire fase wordt ook wel film dikte
genoemd. Hoe dikker deze is, hoe langer de
retentie tijd.
Soort kolom Polariteit.
HP1 Is het meest apolair
HP5 Is redelijk apolair
De analyse wordt bij een bepaalde temperatuur DB-WAX Polaire kolom
gedaan. Dit kan isocratisch (temperatuur blijft
hetzelfde) of met een gradiënt (temperatuur stijgt zoals jij het hebt ingevoerd). Door een gradiënt te
gebruiken kan je de analysetijd inkorten, aangezien stoffen met een hoger kookpunt sneller uit de
kolom komen, aangezien ze zich dan in de gasfase bevinden. Het draaggas is vaak waterstof, stikstof
of helium (op basis van splitration is dit meer of minder).
Detectoren eigenschappen
FID (Flame Molecuul komt aan de onderkant van detector binnen. Waterstofgas
Ionisatie Detector) wordt binnengebracht via zijkant er ontstaat een vlam. Door vlam
wordt component geïoniseerd (moet C in component zitten). Ion wordt
stroom. (per soort stof andere detector)
MS detector 1e stap is ionisatie door beschieting met elektronen. Hierdoor worden
stukken van molecuul weggeslagen zodat je verschillende massa’s per
molecuul krijgt. Je krijgt een chromatogram en massa spectrum.
MS kan zeer lage concentraties meten in vergelijking met FID en het heeft gelijkwaardige
fragmentatiepatronen over de hele wereld.
, HPLC
Voor vloeibare stoffen die niet vluchtig
zijn.
Werking HPLC injector: Bij het vullen in
de load-stand is er een directe
verbinding tussen de pomp en kolom,
er zal dus geen monster door de kolom
lopen. Ook is er op dat moment een
verbinding tussen de monsterpoort en
afvalpoort via de loop. Deze loop heeft
een gekozen volume zodat de
hoeveelheid monster precies bepaald kan worden, aangezien het monster na injectie in de loop
blijft. Daarna wordt de injector op inject-stand gezet
en zal er een verbinding ontstaan tussen de pomp,
kolom en loop, zodat het monster in de kolom komt.
Kolom
Bij de HPLC vindt er scheiding plaats op basis van Kolom Eigenschappen
polariteit (log P) en aanwezigheid van pKa. Ook is C18 Rond deeltje waar een silica groep aan
de structuurformule belangrijk, aangezien grote zit. (zeer apolair)
moleculen er moeilijker uitkomen. Wanneer de Ion Retentie op basis van lading (m.f. heeft
pKa en pH gelijk zijn, zijn de helft van de deeltjes exchange tegenovergestelde lading en spoelt
geladen en dit wil je niet. Daarom moet er een kolom dus door.
buffer worden toegevoegd met een bepaalde pH.
Als de pKa > 7, moet er een buffer van 2 hoger worden toegevoegd (pH = 9). Is de pKa < 7, dan moet
er een buffer met een pH van 2 lager dan de pKa worden toegevoegd (pKa=5, pH = 3). De kolom kan
maar een pH tussen 3 en 8 aan, dus hier moet je mee oppassen.
Detector
Detector eigenschap
UV (VWD) Meet UV-VIS licht (van 190 nm tot 900 nm) Detecteert stoffen in dit golflengtegebied. Één
golflengte tegelijk. (kwartsglas gebruikt)
DAD Meet UV-VIS licht (van 190 nm tot 900 nm) Detecteert stoffen in dit golflengtegebied. Kan
meerde golflengtes of een heel spectrum tegelijk meten.
FLD Zendt een bepaalde golflengte uit en ontvangt een andere (komt door absorptie) Van 200
tot 600 nm. Geconjugeerde stoffen fluoresceren (wisselen tussen enkel en dubbele
bindingen).
ELSD Kan alles meten. Vloeistof wordt een spray. Deze kleine druppeltjes mobiele fase worden
verdampt. Het overgebleven molecuul gaat door een lichtstraal. Vervuiling wordt mee
gemeten. Molecuul moet hoger kookpunt hebben dan m.f.
MS 1e stap is ionisatie van molecuul. 2e stap is scheiding op basis van lading. Afhankelijk van
instellingen apparaat, er is dus geen databank.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller isisknoop. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.72. You're not tied to anything after your purchase.
