100% satisfaction guarantee Immediately available after payment Both online and in PDF No strings attached
logo-home
Previously searched by you
Previously searched by you
logo
Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: hoofdstuk 11 $5.29
Add to cart
Quickly navigate to
Preview
  2.  
  3. Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  4.  
  5. Biomedische Wetenschappen
  6.  
  7. Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1

Summary

Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: hoofdstuk 11
 0 purchase
  • Course
  • Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
  • Institution
  • Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)

Samenvatting van hoofdstuk 11 uit het vak Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1. Dit hoofdstuk gaat over Elektroforese en Western Blot. Samenvatting gemaakt aan de hand van de slides en de hoorcolleges.

Preview 2 out of 7  pages

Document information

  • August 6, 2023
  • 7
  • 2022/2023
  • Summary

Subjects

  • methoden
  • elektroforese
  • western blot
  • gelelektroforese
  • page

Written for

  • Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  • Biomedische Wetenschappen
  • Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
All documents for this subject (40)

Seller

avatar-seller
laurebrants

Reviews received

Content preview

Hoofdstuk 11: elektroforese en western blot
→ belang: technieken om (specifieke) biomoleculen van elkaar te scheiden

1) Introductie elektroforese

- Principe: scheiding van geladen deeltjes op basis van grootte doordat ze doorheen een gel
worden gestuurd onder invloed van elektrisch veld
o Elektrisch veld: laat geladen deeltjes bewegen
o Gel: 3D matrix die als een zeef werkt
- 2 gelsystemen:
o Agarose: polysacharide → scheiding van nucleïnezuren
 Horizontale gel
 Niet-toxisch
o Polyacrylamide: cross-linked polymeer van acrylamide → scheiding van eiwitten
 Acrylamide + methyleenbisacrylamide (=cross linker) + katalysatoren (=
TEMED of ammonium persulfaat
 Verticale cel + kleinere poriegrootte
 Onbewerkte acrylamide = neurotoxisch
 Denaturerende condities of natief
 Denaturerend = 3D structuur van eiwit wordt afgebroken: je
analyseert de lineaire AZ-sequentie
 Natief = biomoleculen hebben intacte structuur

2) Agarose gel elektroforese

- Scheiding van nucleïnezuren op een agarose gel
- Voorbereiden opstelling
o Gieten van agarose gel
 Agarose poeder + buffer → opwarmen zodat agarose smelt
 Buffer = TAE of TBE → tris-acetaat-EDTA of tris-boor-EDTA
 EDTA = bindt divalente kationen (Ca2+, Mg2+) want bv Mg wordt
gebruikt door enzymen die DNA en RNA afbreken
→ door EDTA toe te voegen stabiliseer je DNA en RNA
 Laten afkoelen in gelbakje met kam
o Staalvoorbereiding
 Laadbuffer toevoegen aan je DNA/RNA staal
 Kleurstoffen: zien hoe ver je staal migreert, maar bindt niet met DNA/RNA
zelf → broomfenolblauw of xyleencyanol
 Glycerol toevoegen: staal zwaarder maken zodat het staal in de gel blijft en
niet naar boven drijft in het water dat boven de gel wordt toegevoegd

o Gel laten lopen
 DNA stalen in “welletjes”
deponeren

,  DNA ladder/ marker toevoegen = mengsel van DNA fragmenten met gekende
lengte → referentiewaarden



o Visualiseren via bindende kleurstoffen
 Bij DNA/RNA binding geven bepaalde kleurstoffen een fluorescent signaal
onder UV of blauw licht
 Ethidiumbromide (EtBr):
 Signaal bij UV licht → ogen en huid beschermen + DNA beschadigt
 Zeer gevoelig (1-5 ng (nanogram))
 Toxisch en mutageen/ carcinogeen
 SYBRsafe:
 Blauw licht en UV licht
 Zeer gevoelig (1-5 ng)
 Minder mutageen, maar nog steeds toxisch
- Toepassingen:
o Lengte DNA fragment nakijken
o Scheiden van DNA fragmenten voor opzuiveren
 DNA fragmenten liggen door elektroforese verder uit elkaar → isoleren van 1
fragment door dit uit de gel te snijden
 DNA uit gelblokje isoleren/ zuiveren
o Nakijken integriteit RNA:
 RNA → veel rRNA → coderen voor 2 subeenheden ribosomen dus gaan 2
grote signalen uitzenden
 2 duidelijke ringen: RNA is intact
 Signaal is uitgesmeerd: RNA is gedegradeerd = afgebroken door RNase

- Gelpercentage bepaalt de poriegrootte van gelmatrix !!
→ hoe lager percentage, hoe groter de poriën, hoe verder DNA fragmenten kunnen migreren
→ je moet dus een percentage kiezen dat compatibel is met de DNA fragmenten die je wilt
analyseren!!

3) Polyacrylamide gel elektroforese (PAGE)

- SDS-PAGE → scheiding volgens massa/grootte
o SDS = sodium dodecyl sulfaat = anionisch detergent
o Principe: denaturerende werking
 SDS toevoegen → bindt met aan aminozuren van eiwit → ontvouwt eiwit en
geeft een uniforme negatieve lading
 2-mercaptoethanol → disulfidebruggen breken
 Opwarmen tot 70°C → eiwit wordt beweeglijker en gaat makkelijke
ontvouwen (niet hoger als 70°C → samenklitten)
o Lineaire structuur met negatieve lading (proportioneel aan lengte & massa eiwit)
op/in de gel laden
o Negatieve pool aan kant van staal → elektrisch afstotend → migratie richting
positieve pool = elektrisch aantrekkend

The benefits of buying summaries with Stuvia:

Guaranteed quality through customer reviews

Guaranteed quality through customer reviews

Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.

Quick and easy check-out

Quick and easy check-out

You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.

Focus on what matters

Focus on what matters

Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!

Frequently asked questions

What do I get when I buy this document?

You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.

Satisfaction guarantee: how does it work?

Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.

Who am I buying these notes from?

Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller laurebrants. Stuvia facilitates payment to the seller.

Will I be stuck with a subscription?

No, you only buy these notes for $5.29. You're not tied to anything after your purchase.

Can Stuvia be trusted?

4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)

68175 documents were sold in the last 30 days

Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 15 years now

Start selling
$5.29
  • (0)
Add to cart
Added