Meetrapport voor het praktijkvak MBE over de kolonie PCR. Alles is uitgewerkt volgens het beoordelingsmodel. Er is een 9,1 behaald voor de presentatie aan de hand van dit meetrapport.
MBE Meetrapport kolonie-PCR
Leerjaar 2 Biologie en Medisch Laboratoriumonderzoek MBE
Doel kolonie-PCR
Met de kolonie-PCR kan worden gecontroleerd of de ingebrachte insertie in de plasmide aanwezig is
en of deze in de juiste oriëntatie aanwezig is. Dit wordt gedaan met behulp van primers die aan een
specifieke sequentie in de insertie en in de plasmide binden. Hierdoor wordt er een product gevormd
van bekende grootte. Als het resultaat overeenkomt met deze grootte, is de oriëntatie juist.
In deze proef wordt gecontroleerd of het H2B-gen met GFP juist is gekloneerd in plasmide pDM317.
Na het uitvoeren van de kolonie PCR wordt een gelelektroforese uitgevoerd. Op deze manier kan de
grootte van de DNA-fragmenten worden weergeven. Aan de hand hiervan kan worden bepaald of de
insertie aanwezig is en of deze in de juiste oriëntatie in de plasmide zit.
Verwachting kolonie-PCR
Voor het uitvoeren van de kolonie PCR wordt er een mastermix bereid met componenten die aan de
monsters moeten worden toegevoegd. Er is een mastermix gemaakt voor 7 reacties, bestaande uit:
In onderstaande tabel 1 zijn de verwachtingen van de monsters voor de PCR weergeven.
Tabel 1: verwachtingen van de kolonie-PCR
Reacti Input (monster) Verwachting
e
1 Ligatiemengsel: pDM317 en H2B + GFP aan elkaar 613 bp
geligeerd. Verkregen uit transformatie 1.
Mastermix
2 Ligatiemengsel: pDM317 en H2B + GFP aan elkaar 613 bp
geligeerd. Verkregen uit transformatie 1.
Positieve
controle Mastermix
3 Ongeknipt plasmide (zonder H2B). Verkregen uit Geen bandje, want er
Negatiev transformatie 3. is geen insertie
e aanwezig waar de
controle Mastermix primers aan kunnen
hechten.
4 MilliQ en mastermix (blanco) Geen bandje, want er
is geen insertie
aanwezig waar de
primers aan kunnen
hechten.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller isabeldevette. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.96. You're not tied to anything after your purchase.
