College aantekeningen

Pathologie Overzicht van alle onderzoekskmethoden behandeld in de gehele studie

0 keer verkocht

Vak
Pathologie

Instelling
Universiteit Utrecht (UU)

Overzichtelijke samenvatting van alle onderzoeksmethoden die zijn behandeld gedurende de studie. Dit is erg handig voor het laatste tentamen waar je zelf onderzoeken moet opstellen!

[Meer zien]

Voorbeeld 2 van de 8 pagina's

Bekijk voorbeeld

Geupload op 13 september 2023
Aantal pagina's 8
Geschreven in 2022/2023
Type College aantekeningen
Docent(en) -
Bevat Alle colleges

onderzoeksmethoden

Instelling
Universiteit Utrecht (UU)
Studie
Biomedische Wetenschappen
Vak
Pathologie

Volgen

fleurheling

Lid sinds 4 jaar 32 documenten verkocht

$7.24

In winkelwagen

Opslaan

100% tevredenheidsgarantie
Direct beschikbaar na je betaling
Lees online óf als PDF
Geen vaste maandelijkse kosten

PATHOLOGIE
ONDERZOEKSMETHODEN
Eiwit detectie
Gelelektroforese
• Geladen moleculen, zoals DNA, RNA en eiwitten scheiden op basis van grootte
• Elektrisch veld met een gel met kleine poriën -> soort zeef
• DNA en RNA zijn negatief geladen en zullen naar positieve lading bewegen (naar beneden). Hoe
kleiner de moleculen hoe verder ze in de gel komen
• Bandjes krijg je als je van één bepaalde grootte, veel fragmenten hebt (DNA wel zichtbaar maken
met bv. fluorescentie). Door een marker toe te voegen, creëer je een referentie
• 2D-elektroforese begint met elektroforese in de eerste dimensie en scheidt vervolgens de
moleculen loodrecht van de eerste om een elektroferogram in de tweede dimensie te creëren.
Bij elektroforese in de eerste dimensie worden moleculen lineair gescheiden volgens hun iso-
elektrisch punt. In de tweede dimensie worden de moleculen vervolgens op 90 graden van het
eerste elektroferogram gescheiden volgens de molecuulmassa. Met 2D-elektroforese scheid je
de moleculen dus effectiever dan met 1D-elektroforese
• Voor het scheiden van eiwitten gebruik je SDS-PAGE

SDS-PAGE
• Eiwitten uit eiwitmengsel scheiden op basis van grootte (molecuulgewicht)
• Eiwitten zijn niet negatief geladen en daarom moeten de eiwitten gemengd worden met een
detergent, SDS. Hierdoor wordt het eiwit ontvouwen en krijgt het een lineaire vorm met een
negatieve lading. Op deze manier kunnen de eiwitten naar de positieve pool bewegen
• Monsters worden na elektroforese met Coomassie Blue gekleurd. Vervolgens worden de
monsters vergeleken met moleculaire ladder om molecuulgewicht te bepalen
• ß-mercapto-ethanol (reductans) of dithiothreitol (DTT) wordt toegevoegd om
zwavelverbindingen te verbreken
• Door de vouwing kan een eiwit zich kleiner voordoen dan dat die eigenlijk is. Dus dimeer is niet
per se 2x zo zwaar als monomeer

Western Blot
• Detectie van specifieke eiwitmoleculen in een mix van eiwitten. Kan ook gebruikt worden om de
grootte van een eiwit te bepalen en om de hoeveelheid eiwitexpressie te meten
• Wordt altijd voorafgegaan door SDS-page
• Eiwitten wordt getransporteerd vanaf gel naar blotting membraan. Vervolgens ondergaat het
membraan een behandeling die blocking wordt genoemd en die voorkomt dat niet-specifieke
reacties optreden. Het membraan wordt vervolgens geïncubeerd met een antilichaam dat het
primaire antilichaam wordt genoemd en dat specifiek bindt aan het eiwit van belang. Na
incubatie wordt eventueel ongebonden primair antilichaam weggewassen en wordt het
membraan opnieuw geïncubeerd, maar deze keer met een secundair antilichaam dat specifiek
het primaire antilichaam herkent en eraan bindt. Het secundaire antilichaam is gekoppeld aan
een reporter-enzym dat kleur of licht produceert, waardoor het gemakkelijk kan worden
gedetecteerd en afgebeeld. Deze stappen maken het mogelijk een specifiek eiwit te detecteren
uit een mengsel van eiwitten
• Een semi-kwantitatieve schatting van een eiwit kan worden afgeleid uit de grootte en
kleurintensiteit van een eiwitband op het blotmembraan.
• Toepassing: eiwit-eiwit interacties onderzoeken -> eiwit op membraan doen en dan andere
eiwitten toevoegen -> kijken of er complexen gevormd zijn dus of er eiwitinteracties zijn

, Microscopie
• Met HE-kleuring worden de celkernen paars aangekleurd en het cytoplasma licht roze. Het kleurt
alle cellen die op dat moment in het weefsel zitten
• Gramkleuring: positieve bacteriën kleuren blauw/paars en negatieve bacteriën rood/roze

Immuunhistochemie
• Met specifieke antistof een eiwit naar keuze aankleuren in een weefsel
• Voordelen: locatie van eiwit zien: membraan, cytoplasma of kern
• Nadelen: kwalitatief en niet kwantitatief, epitoop is niet altijd beschikbaar omdat deze al
gebonden is

Confocale microscopie
Als je echt in de cel wilt gaan kijken wordt er gebruik gemaakt van fluorescentie. Dit is veel gevoeliger
dan dat je gebruikt maakt van antistof met gewone kleuring.

In situ hybridisatie
• Type hybridisatie waarbij gebruik wordt gemaakt van een gelabelde
complementaire DNA-, RNA- of gemodificeerde nucleïnezuurstreng
(probe) om een specifieke DNA- of RNA-sequentie te lokaliseren in een
gedeelte of sectie van weefsel (in situ) of als het weefsel klein genoeg
is (bijv. plantenzaden, Drosophila-embryo's), in het gehele weefsel, in
cellen en in circulerende tumorcellen (CTC's).
• FISH (Fluorescentie-in-situhybridisatie) om locatie van DNA-sequenties
op mitotische chromosomen zichtbaar te maken
• Dit verschilt van immunohistochemie, die gewoonlijk eiwitten in
weefselcoupes lokaliseert.
• Het is een cruciale stap voor het begrijpen van de organisatie,
regulatie en functie van genen

cDNA maken
• Door cDNA te analyseren kan je expressiepatronen van bepaalde
eiwitten in verschillende weefsels analyseren
• cDNA kan je gebruiken om bacteriën grote hoeveelheden eiwit te produceren. In het cDNA zitten
alleen de exonen dus hoeft de bacterie niet nog te splicen.
• Met behulp van reverse transcriptase en een poly-T primer, zet je alle op dat moment aanwezige
mRNA’s uit de cellen om in dubbelstrengs-DNA. Er ontstaat een DNA streng die aan de hand van
mRNA is gemaakt = cDNA
• Je hebt dubbelstrengs molecuul (streng cDNA en streng mRNA), dus voeg je RNAse toe, die
mRNA in stukjes knipt. Vervolgens maak je andere steng cDNA → dsDNA

Antistoffen maken
• ‘Aangenomen dat er specifieke antilichamen zijn voor dit eiwit’
• Als je de antistoffen niet hebt, moet je die zelf maken:
o Monoklonale: muis →Meest specifiek, je hebt één specifiek epitoop
o Polyklonale: elk dier (kiezen voor paard, dit is een groot dier dus krijg je veel antistoffen)
→ Verschillende epitopen op één eiwit

ELISA
• Meten van eiwitten in bloedmonsters/serum -> eiwitconcentratie bepalen
• Kwantitatief

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, creditcard of je Stuvia-tegoed en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Direct to-the-point

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper fleurheling. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor $7.24. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 64257 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Begin nu gratis

Laatst bekeken door jou

Oefenvragen ·

(2)

Oefenvragen Fitnesstrainer B Hoofdstuk 3 Testen en Meten

Case uitwerking ·

(0)

Business Ethics Assignment 5 Film Review

College aantekeningen ·

(0)

Week 2 Class Notes Nurs 222 Mental Health WCU

Tentamen (uitwerkingen) ·

(0)

OSCE – 2022/166 QUESTIONS AND ANSWERS (A+)

Samenvatting ·

(0)