Class notes
Onderzoeksmethoden Thema 3 Flowcymetrie
- Course
- Institution
Hoorcollege over flowcymetrie en het protocol is uitgebreid en overzichtelijk uitgewerkt in dit document.
[Show more]
Seller
Follow
fleurheling
Reviews received
Content preview
FLOWCYMETRIEHOORCOLLEGE FLOWCYMETRIE
Betekenis flowcymetrie
• Flow: cellen in beweging
• Cyto: cellen
• Metry: meten
• Een technologie die gelijktijdig meerdere fysieke kenmerken van afzonderlijke deeltjes,
gewoonlijk cellen, meet en analyseert terwijl zij in een vloeistofstroom door een lichtbundel
stromen.
• De metingen worden per cel verricht op een routinesnelheid van 500 tot 4000 cellen per seconde
• FACS: Fluorescence Activated Cell Sorting. Je meet dan niet alleen, maar je gaat ze ook sorteren.
Wat kunnen we analyseren met FC?
• Meercellige organisme
• Eukaryotische cellen
• Cellulaire organellen
• Bacteriën
• Liposomen
• Virussen
• Enkele moleculen
Wat kan FC ons vertellen over een cel?
• Relatieve grootte (Forward Scatter – FSC)
o Verstrooit licht
o Gerelateerd aan de celoppervlak
o Wordt in de lijn met het licht gemeten: Light Scatter Diode
• Relatieve interne complexiteit (Side Scatter – SSC)
o Gereflecteerd en gebroken licht
o Heeft te maken met cel granuliteit en complexiteit
o Wordt op 90 graden van de laser gemeten
• Relatieve fluorescentie intensiteit (FL1, FL2, FL3, FL4, etc.)
Scatter Plot
• Hoe groter de cel, hoe verder naar rechts de stop op de x-as zit.
• Hoe complexer de cel, hoe hoger deze op de y-as zit.
• Voorbeeld: lymfocyten, monocyten, granulocyten.
Fluorescentie
• De verschillende fluorochromen absorberen het laserlicht
(=excitatie/absorptie) en zenden licht uit met een hogere
golflengte (= emissie)
• Kleur (emissiegolflengte) van dit licht is afhankelijk van het
gebruikte fluorochroom.
• Een fluorescente groep wordt aangeslagen met de laser, deze
komt in een hogere energie staat, vervalt en emitteert licht met
ietjes minder energie, de golflengte wordt dus hoger.
• Mate van fluorescentie geeft maat van binding weer, laag en
hoog positief voor de marker
• Strokes shift: het verschil tussen de golflengte van absorptie en emissie
, •
Werking flowcell
• De cellen uit de monsterbuis worden in de mantelstroom geïnjecteerd.
• De stroom in een stroomcel is laminair: je zit in het midden van je sample.
• Het hydrodynamische focussing (concentratie op 1 plek) duwt de cellen om 1
lijn te vormen langs hun lange as (horizontaal)
• De vorm van de flowcel verstrekt de mogelijkheid voor hydrodynamisch
focussing van de cellen.
Werking flowcytometer
• Vloeistofsysteem
o Pomp brengt sheat fluid op druk
o Sheat fluid loopt door een filter
o Sheat fluid gaat door een flowcell
o Eindigt in afval vat
o Injectienaald injecteert in flowcell
o Verdwijnt hierna ook in afval vat
→ Om de cellen in te brengen en te focussen
voor ondervraging
• Hydrodynamic focusing
o In de flowcell is het belangrijk dat de
cellen een voor een door de laserstraal
gaan
o Je hebt een continue stroming van de
sheath vloeistof, je sample wordt daar met een iets hogere druk ingevoerd
o De sheath vloeistof drukt hierdoor de sample samen, omdat deze stromen niet mengen krijg
je laminaire stroming waarin alle cellen oplijnen.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller fleurheling. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.81. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
52355 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now