Summary
Samenvatting verlagen enzymologie
- Course
- Institution
verslagen enzymologie jaar 2 FBT
[Show more]
Seller
Follow
lauradries1
Reviews received
Content preview
PRACTICUM ENZYMOLOGIEMaaren De Houwer en Laura Dries
Doel:
Er wordt onderzoek gedaan naar inhibitoren. De inhibitor wordt bepaald (competitief of niet competitief) door
reactiesnelheden te vergelijken zonder en met inhibitor.
Eerst werd de bepaling van de maximale reactiesnelheden (Vmax) bij een continue en discontinue meting uitgevoerd,
de reactiesnelheidsconstante (k3) in functie van de enzymconcentratie ([E] in U/L) of de substraatconcentratie ([S] in
mM) bepalen. Het bepalen van de Michaëlis-Menten constante (KM) bij kamertemperatuur en bij constante pH-
waarde. Dit met behulp van spectrofotometrie (kinetisch programma).
Reacties:
- Reactie 1: vorming p-NA en Benzoyl-arginine door toevoeging van trypsine aan BAPNA
- Reactie 2: vorming p-NF en p-nitrofenolaat door toevoeging zure fosfatase bij pNPP
,Principe:
Analysemethode: spectrofotometrie met kinetisch programma
Bepalingsmethode: -standaardijklijn methode
-Hanes Woolf transformatie
Formules:
- Wet van Lambert-Beer: ! = $ % & % ' met: E = extinctie
e = molaire extinctiecoëfficiënt (L/mol.cm)
l = weglengte (cm)
C = concentratie oplossing (mM of U/L)
$
- (!"# = %&'(
met: Vmax = maximale reactiesnelheid (mol/L.min)
rico = richtingscoëfficiënt
∆*/!&,
- )= met: v = reactiesnelheid (mol/L.min)
-
ΔE/min = richtingscoëfficiënt
Ɛ= molaire extinctiecoëfficiënt (L/mol.cm)
/
- ). = [*]
met: v’ = reactiesnelheid’ (mmol/min.U)
V = reactiesnelheid (mol/L.min)
[E] = concentratie gebruikte enzym (U/L)
"
- *2 = 3 met: KM = Michaëlis-Menten constante (mM)
a = richtingscoëfficiënt
b = intercept met y-as
[4] [4].
- = met: v’ =
5. 5.
reactiesnelheid’ (mmol/min.U)
[S]’ = verdunde
substraatconcentratie (mM)
[7]
- +6 = ! met: Ki = dissociatieconstante inhibitor (mM)
8 " 9
!#$
[I] = concentratie inhibitor (mM
bi = intercept y-as van geïnhibeerd reactie
b = intercept y-as van niet-geïnhibeerde reactie
MEETRESULTATEN, GRAFIEKEN EN INTERPRETATIES:
BEPALING VAN DE MOLAIRE ECTINCTIECOËFFICIËNTEN VAN P-NF EN P-NA
De molaire extinctiecoëffieciënten van P-NF en P-NA werden bepaald omdat deze nadien nodig zijn voor
het bepalen van de reactiesnelheid van het enzym trypsine. De extinctiemetingen van een
verdunningsreeks van P-NA en P-NF werden hiervoor gemeten en uitgezet in functie van de concentratie
van het substraat. Aan de hand van de wet van Lambert-Beer kan op deze manier de extinctiecoëfficiënt
vastgesteld worden door de richtingscoëfficiënt van de ijklijn te bepalen.
, De molaire extinctiecoëfficiënt Ꜫ van p-NF is gelijk aan 45,75 L. mmol-1. cm-1.
De molaire extinctiecoëfficiënt Ꜫ van p-NA is gelijk aan 7,5141 L. mmol-1. cm-1.
De extinctiemetingen bevatten bij beide experimenten geen outliers. Wel is het belangrijk te vermelden
dat het experiment van de extinctiecoëfficiënt van P-NF weinig betrouwbaar is door de lage R2.
P-NF
Tabel 1: Extinctiemetingen van p-NF en outliers gemeten bij 410nm met de bijhorende concentratie in mmol/L voor de 10 verschillende
cuvetten. Outliers van de gemeten extincties van P-NF
Grafiek 1: De extinctie in functie van de concentratie van p-NF gemeten bij 410nm op kamertemperatuur met een ph van 5,6
Tabel 3:
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller lauradries1. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.85. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
68175 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 15 years now