Summary
Samenvatting Immunologie - deel gegeven door Delputte - 17/20 behaald
- Course
- Institution
Deel van het vak immunologie en immunopathologie dat gegeven wordt door Delputte. Duidelijke samenvatting van zijn lessen.
[Show more]
Seller
Follow
DGKstudent317
Reviews received
Content preview
IMMUNOLOGIE PARTIM PROF. DELPUTTEFLOW CYTOMETRY
= cruciaal instrument binnen de immunologie, men kan hiermee cellen identificeren
WERKING
- Bevat een buisje met een hele fijne naald. Het buisje bevat vloeistof dat door de
naald wordt opgezogen, inclusief alle cellen
- De vloeistof wordt opgezogen & vervolgend door een hele dunne buis geduwd,
zodat er maar 1 cel tegelijkertijd door kan. Dit is het flow principe
- Vanwege hydrodynamica is er een goede flow & ontstaat er geen ophoping
- Elke cel passeert vervolgens een lichtstraal, waarna vervolgens wordt gemeten
welk licht erheen komt.
FORWARD SCATTER (FSC)
- Wordt gemeten: zal de lichtdensiteit meten: hoeveel licht gaat er doorheen de cel?
SIDE SCATTER (SSC)
- Meet de lichtverstrooiing: zegt iets over aantal granules (meer granules meer verstrooiing)
1
,MULTIPARAMETRISCHE DOTPLOT
Ieder puntje is een cel. Je weet zo hoeveel licht er doorheen is gegaan
- D= aangenomen debris, zeer kleine partikels met heel lage FSC & SCC
- L/M zijn waarschijnlijk leukocyten/ monocyten. Kleine tot middelgrote
cellen met weinig interne complexiteit of granulatie. Deze cellen
genereren een middelgrote FSC & een lage SCC-signaal intensiteit
- G zijn granulocyten. Dit zijn grote cellen met een grote interne
complexiteit of granulatie. Ze genereren daarom sterke FSC & SCC
signalen.
FLUORESCENTIE (FL)
Aangezien lymofcyten er op deze manier allemaal hetzelfde uitzien, is er een bijkomende methode nodig.
Door monoklonale antistoffen te maken die maar 1 CD herkennen kunen ook T-cellen van elkaar onderscheiden
worden
- Deze antistoffen worden fluorescent gelabeld (FL) & bij de vloeistof gedaan.
- Vervolgens wordt er ipv gewoon licht, UV-licht doorheen gestraald, in bepaalde frequenties
- De fluorochromen binden aan bepaalde cellen in een bepaalde mate. In het appraat zitten meters die
bepaalde spectra meten, op die manier valt voor iedere cel te zien hoeveel signaal er aanwezig is
- Als er veel antistoffen gebonden zijn, zijn er veel receptoren & geeft dat een sterk signaal. Zo valt te zien of
er bv veel CD4 of juist CD8 op de cellen zit.
DOT PLOT VS PICTOGRAM
DOT PLOT
- Op dot plot ziet men op x-as welk fluorochroom het beste op welke manier bindt.
o Rechts= hopge concenetratie. Hier zijn de meeste macro’s positief
- Dot plots worden v eel gebruikt voor FSC & SCC, maar ook om complexe populaties zichtbaar
te kunnen maken
HISTOGRAM
- Wordt meer gekeken naar bepaalde events: hoeveel cellen hebben een
bepaald karakter?
- Er wordt een controle-as gebruikt waarvan we weten dat die cellen niet
zouden mogen binden & de waardes daar dus niet binnen kunnen vallen
- Hiervoor wordt een cut-off gezet, vanaf die waarde kan men zien hoeveel
cellen er positief zijn, maar ook of er een verschil is voor vs na een
immunisatie.
IMMUNOLOGICAL STAINING: FSC – SCC – CD4 – CD8
2
, AANMAAK
- Om bepaalde cellen te merken
- Hiervoor wordt bloed afgenomen, waarvan de cellen in cultuur worden gezet.
- Hierbij zullen de cellen dissociëren, waardoor men afzondelrijke cellen in suspensie overhoudt
- Aan deze suspensie worden fluorescent gemerkte antistoffen toegevoegd, die al dan niet binden aan de cel
UITKOMST ADHV DOT PLOTS
- Op de dot plots worden telkens dezelfde populaties bekeken, met verschillende fluo merkers (CD4 & CD8
antistoffen)
- Bij het eerste plaatje is de populatie onderaan de lymfocyten, de populatie in het midden zijn de
monocyten & de uitgesmeerde vlek zijn de granulocyten
- hier wordt gekeken naar SCC & FSC, adh daarvan kan men nl zien dat er werkelijk verschillende populaites
zijn (L, M, G)
- men kan vervolgens een selectie maken, door een gate (R(egio)) in de SSC/ FSC te selecteren
o in dit geval de rode groep, de lymfocyten
o men ziet dan dat alle stipjes bij CD8 positief zijn. Ook CD4 is rood.
- De blauwe populaite zijn de monocyten, zoals we aan de SSC/ FSC zien bevatten een kleine hoeveelheid
CD4
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller DGKstudent317. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $7.58. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
79373 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now