Summary
samenvatting gel elektroforese
- Course
- Institution
samenvatting gel elektroforese
[Show more]
Seller
Follow
lorevanvreckem
Content preview
1. Gel elektroforese Scheiding van moleculen (DNA, RNA, EW) op basis van grootte
Scheiding gedreven door de negatieve lading van moleculen
Fosfaatgroep (-)
Suiker
Base
O.i.v elektrisch veld bewegen moleculen richting pos pool door een gel
= kathode (+) naar anode (-) (KNAP)
1.1. Eiwitten
Eiwitscheiding m.B.v verticale elektroforese
Gel = polyacrylamide
Coomassie blauw bindt niet – specifiek aan = EW
1.2. DNA
DNA gescheiden m.B.v horizontale elektroforese
Gel = agarose
Nancy of redsafe (vroeger ethidium bromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA
voor visualisatie
DNA in slots
Elektrisch veld
Migratie neg geladen DNA naar pos pool
Visualisatie m.B.v fluorescente dye die bindt aan dsDNA en fluorisceert onder UV licht
Stappenplan: methode en principe
Aanmaak buffer
Aanmaak agarose gel
Laden gel
Elektroforese
DNA visualisatie
1.2.1. Aanmaak buffer
TBE of TAE (2 – voddige beschermende functie voor DNA molecule)
Trips = base Bufferwerking, licht alkalisch -> beschermt DNA
Boorzuur of acetaat = zuur Tegen hydrolyse.
EDTA blokkeert werking van DNase
1.2.2. Aanmaak agarose gel
1
, Agarose = extract van zeewier (vergelijkbaar met gelatine)
Moleculaire zeef
Kleinere molecule bewegen sneller dan grotere moleculen
Grootte DNA molecule uitgedrukt in bp
Agarose poeder vermengen met buffer en opwarmen tot kookpunt
Percentage gel kan aangetast worden
- Vb: 1% agarose gel = 1 g agar/100 ml buffer
Keuze percentage gel hangt af van grootte te scheiden fragmenten
- Kleine frag = hoger percentage gel
- Grote frag = lage percentage gel
Na opwarmen tot kookpunt van mengsel agarose en buffer
Toevoegen fluorescente kleurstof
- Nancy
- Redsafe
- Diamond
- Vroeger ethidium -> zeer toxisch
Na opwarming tot kookpunt van mengsel agarose en buffer
Toevoegen fluoricente kleurstof
Laten afkoelen tot handwarm
Uitgieten in mal = gietvorm/matrijs
Toevoegen slotkam -> slotje vormen
Laten stollen/uitharden
Kammetje verwijderen
1.2.3. Laden van de gel
Pipetteren van DNA oplossing in slotje van de gel
Gel in elektroforese toestel + TBE buffer (onderdompelen)
DNA mengen met loading dye (= laadbuffer)
- Kleurstof: opvolgen pipetteren en elektroforese
- Glycerol: densiteit verhogen zodat DNA oplossing in slotje zakt
- EDTA: beschermen DNA tegen nucleases
Hoe frag grootte bepalen na scheiding van frag?
Pipetteer in 1e laantje DNA ladder = moleculaire merker
Mengsel DNA fragmenten van gekende lengte worden meegelopen tijden
selektroforese
- = referentie waarmee te onderzoeken frag vergeleken kunnen worden
1.2.4. Elektroforese
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller lorevanvreckem. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.16. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67866 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now