Summary
Samenvatting toolbox PCR
- Course
- Institution
Samenvatting biotechnologie toolbox PCR
[Show more]
Seller
Follow
lorevanvreckem
Content preview
1. PCR1.1. Wat is PCR
Polymerase Chain Reaction of
polymerase ketting reactie
Belangrijke biotechnologische tool om 1 stukje DNA (of RNA) in vitro miljoenen keer
te vermenigvuldigen in een korte tijd (een paar uur)
PCR reactie lijkt erg op de replicatie van DNA zoals die in de natuur plaatsvindt
DNA replicatie (zie knowledge 4.4): verdubbeling DNA bij celdeling
PCR reactie = in vitro versie van DNA replicatie
! veel meer dan 2x
Vermenigvuldiging stukje DNA tot miljarden kopijen
kort tijdsbestek (2-3 uur)
Diagnose ziekte, opsporen genen,…
Identificatie bacteriën en virussen e.a. micro-organismen (bv. aantonen
ziekteverwekker)
Forensisch onderzoek
Authenticiteit levensmiddelen adhv DNA
Authenticiteit levensmiddelen
1.2. Toepassingen
1.3. Ontdekking
1983: PCR ontdekt door Kary Mullis
1993: Nobelprijs scheikunde
, 1.4. Werking
PCR: 1 cyclus
Van 1 DNA kopie naar 2 kopieën
PCR = kettingreactie
Herhaling van de stappen
30 a 40x cycli
2-tal uur
1.4.1. Benodigdheden
DNA template: bevat target DNA
Primers: enkelstrengig of single-stranded (ssDNA) die target DNA afbakenen
DNA polymerase: (vgl DNA replicatie), verlengen van keten
Nucleotiden: (= dNTP’s) bouwstenen voor ketenverlenging
Buffer
Cycler: apparaat dat voor temperatuur schommelingen zorgt
1.4.2. 3 belangrijke stappen
STAP 1 : denaturatie
dsDNA (double stranded of dubbelstrengig) wijzigt in ssDNA zodat primers
kunnen hechten in volgende stap
verhogen temperatuur tot 95°C mbv thermocyler
STAP 2 : annealing (= hybridisatie)
vasthechten van primers aan ssDNA
Primers = ssDNA die target DNA afbakenen
Telkens 2 primers = primerpaar: Forward primer & Reverse primer
Temperatuur afhankelijk van primers 50 – 65°C
STAP 3 : elongatie
(= extension/ketenverlenging)
nucleotiden worden ingebouwd om nieuwe (complementaire) DNA streng aan
te maken
Temperatuursafhankelijk 70 – 74°C
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller lorevanvreckem. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.04. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
50843 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now