Summary
samenvatting practicum biochemie en biotechnologie
- Course
- Institution
alle leerstof van de powerpoints, leerpaden, cursus, practica en testen staan hierin verwerkt per hoofdstuk. De vakprof is Katrien Remaut.
[Show more]
Seller
Follow
jadecallebaut
Content preview
Opzuivering en identificatie van DNA= pDNAInleiding:
- pDNA
o pDNA= cirkelvormige dubbele streng DNA
o Ligt buiten chromosomaal DNA
o Genetische info tsn bacteriën uitwisselen
o Kunnen alleen of met honderden in een cel/ bacterie zitten
o Dragen minstens 1 gen
o Kan onafhankelijk repliceren
Origin of replication
o Selectiemarker: gen dat resistentie tegen bepaald antibioticum is
- Plasmide= buiten chromosoom van eencellige organismen
o 3 belangrijke locaties
Origin of replication: replicatie start hier
Multiple cloning site (MPS): sequentie met herkenningssites voor RE
Antibiotica resistentiegen-> selectie
- Kunstmatige plasmiden
o Vaak gebruikt voor genetische modificaties uit te voeren
o Stukken DNA met gewenste eigenschappen aan cel toevoegen
o Gentherapie hiermee
o In wetenschappelijk onderzoek:
Vaak gebruikt om bepaalde structuren fluorescent te kleuren
Plasmiden met GFP (green fluorescent protein)
- Restrictie-enzymen
o Herkent specifieke DNA-sequenties → knipt DNA strengt daar doormidden
o Kunstmatig kan men een nieuw DNA stuk invoegen
o Elk restrictie-enzym → eigen specifieke nucleotidenvolgorde
o Enzym dat een specifieke DNA-sequentie herkent (recognition site) en deze doorknipt
Enzymen knippen bij verschillende plasmiden op verschillende plaatsen
Fragmenten van verschillende groottes
o M.b.v. restrictie: nieuwe genen in plasmide brengen
o 4-8 nucleotiden lang
o Je kan er plasmide mee identificeren
1 enzym knipt in verschillende plasmiden op verschillende plaatsen=> fragmenten van
verschillende groottes
=> nieuw stuk DNA kan ingevoerd w
o Hierna volgt DNA ligase: plakt het plasmide met nieuwe gen terug toe
o Bacteriën w gekweekt in een geschikt medium dat de juiste antibiotica bevat=> enkel bacteriën die
het plasmide bevatten (én het antibioticumresistentiegen) zijn in staat om te groeien
1
, Hierna w bacteriën gelyseerd om de plasmiden te isoleren, nu komt de zuivering
- Vermeerderen van pDNA in bacteriën
o Gewenst plasmide verkregen → opkweken in bacteriën
o Antibiotica rijk medium → enkel plasmiden overleven met
antibioticumresistentie
o Na groeiperiode → gelyseerd om plasmiden te isoleren
2
, DNA opzuivering
1.a Lyse van bacteriën 2. Binden van DNA aan silica-kolom 3. Wasstappen
- Om DNA te isoleren - Supernatans op silica kolom brengen - Wassen met zout/ethanol oplossing
- “lysis buffer” - Silica & DNA negatief geladen o Verwijdert onzuiverheden
o Bevat enzymen & o Stoten elkaar af Eiwitten
surfactanten - MAAR we gebruiken een oplossing Overtollige zouten
o Maken celwand bacteriën met een lage pH (veel positief geladen o pDNA nog steeds gebonden aan
kapot protonen) & hoge zoutconcentratie silica
- Inhoud komt vrij (veel positieve tegenionen, Na+)
o Negatieve lading DNA & silica
afgeschermd 4. Elutie
1.b Centrifugatie o => DNA zal binden op silica
- Elutiebuffer op kolom brengen
- Grote celresten (pellet) & o Hoge pH (weinig protonen) & lage
macromoleculen (supernatans) zoutconcentratie (weinig tegen-ionen)
gescheiden Als we niet gebruik maken van een lage pH
oplossing zal DNA niet kunnen binden op het o Negatieve lading niet meer
- (in practicum beginnen we vanaf stap 2 silica afgeschermd
met het supernatans) o pDNA komt los van de kolom
tijdens centrifugatie
- pDNA nu in het eluens (onbekende
Pellet: korrels concentratie)
Supernatans: vloeistof die na
3
het centrifugeren vrijkomt
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller jadecallebaut. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $6.51. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
64438 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now