Samenvatting
Samenvatting - Practicum: biotechnologie en biochemie, Primer Design + Restrictie-enzymen (J000496A)
- Vak
- Instelling
Volledige samenvatting van Practicum Primer Design en Restrictie-enzymen Leerpaden + powerpoints
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 9 pagina's
Voorbeeld 2 van de 9 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
Verkoper
Volgen
marthevanlerberghe
Voorbeeld van de inhoud
Practicum Primer design + REPCR
1/ Wat is PCR?
= Polymerase Chain Reaction
Uitgevonden door Kary Mullis in 1983
Doel: enorme hoeveelheden kopieën genereren van welbepaalde DNA-sequentie
Waarom: genen = zeldzame doelwitten in complex genoom
PCR: genoeg van gen/dna om analyse te starten
2/ Principe van PCR
Uitgangsmateriaal PCR: DNA dat sequentie bevat die geamplificeerd dient te worden
Reactiemengsel
o DNA-polymerase
Enzym verantwoordelijk voor het uitvoeren vd reactie
Gebruikt tijdens DNA-replicatie
o 2 primers: forward & reverse
o dNTPs (A, C, G, T)
Desoxynucleotidetrifosfaten
Bouwstenen DNA
o MgCl2
Co-factor voor DNA-polymerase enzym werkt optimaal
o Buffer
Mengsel op bepaalde pH houden reactie optimaal laten doorgaan
3 stappen in PCR
o Denaturatie
o Annealing
o Elongatie
1 cyclus, n keer herhalen (afh. van aantal
keer nodig)
Denaturatie
o Reactiemengsel wordt opgewarmd tot 95°C-
96°C
o Dubbelstrengig DNA valt uiteen in 2
enkelstrengige DNA-moleculen
= Template DNA voor primers die aanhechten
Annealing
o Mengsel wordt afgekoeld tot ongeveer 60°C (afh van primers)
o Primers aangehecht aan template-DNA
o Kort stuk dubbelstrengig DNA aanwezig, nodig voor DNA-polymerase om aan te
binden
o DNA-polymerase zal adhv. Template-DNA de complementaire basen aanbrengen
Elongatie
o Bij 72°C : optimale T voor DNA-polymerasen om functie uit te voeren
, o Nieuwe gesynthetiseerde strengen strekken zich uit tot voorbij primer op
tegenovergestelde streng
o Er worden nieuwe primer-bindingsplaatsen gecreëerd op elk nieuw gesynthetiseerde
DNA-streng
Na n cycli bevat de reactie een theoretisch maximum
o 2n dubbelstrengige DNA-moleculen = kopieën van DNA-sequenties tss. beide primers
3/ Primers
Kort stuk enkelstrengig DNA, nodig om PCR reactie te starten
Synthetisch aangemaakt
2 primers nodig: forward & reverse
o Forward
Bindt op backward DNA streng
Van 3’ 5’
o Reverse
Bindt op forward DNA streng
Van 5’ 3’
Tm = smelttemperatuur
o Helft primer gebonden op DNA-template en de helft in het mengsel voorkomt als
enkelstrengige DNA-molecule
o Bepaalt annealing temperatuur (ideaal: 3/5°C lager dan laagste Tm vd. primers)
Eigenschappen goede primer
o 20-30 basenparen lang
o Unieke sequentie
Primer enkel thv. targetsequentie binnenkomen
o Ze mogen geen inverted repeats bevatten (hairpins)
Stukje in primer waarvan de complementaire sequentie al een beetje
verder in de primer ook al voorkomt
2 stukken binden aan elkaar want complementair vormt hairpin/loop
Primer kan niet meer binden op DNA-template
o Geen complementariteit tss. forward en reverse primer
Gaan primer dimers vormen
Binden op elkaar, niet meer beschikbaar om te binden op DNa-template
o 3’ uiteinde primer
Rijk aan G en C
Vormen sterkste binding met elkaar, 3 H-bruggen tov. 2 H-bruggen bij A en T
Geen misprime: niet complementair met DNA-template (aan 3’ want elke
nieuwe DNA-streng wordt gesynthetiseerd van 5’ nr. 3’)
Primer moet goed binden thv. 3’ uiteinde: van daaruit start elongatie
o Tm mag max. 3°C verschillen tss. forward en reverse primer
Hechten bij dezelfde annealingtemperatuur aan het DNA-template
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper marthevanlerberghe. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor $9.19. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67096 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen
Laatst bekeken door jou
