Summary
Samenvatting - Practicum: biochemie en biotechnologie, PCR (J000496A)
- Course
- Institution
Volledige samenvatting van Practicum PCR Leerpaden + powerpoints
[Show more]
Seller
Follow
marthevanlerberghe
Content preview
Practicum PCR DNA-profiel: DNA fingerprint
o DNA-profiel dat wordt verkregen, vergelijken met dat van de verdachte
Vingerafdrukken: dactyloscopie
‘match’ of ‘geen match’: verdachte wordt gelinkt of uitgesloten
DNA in de cel
In de kern = nucleair DNA/Genomisch DNA
Chromosomen
Uniek
In het cytosol = mitochondriaal DNA
Genomisch DNA
Coderend DNA (‘genen’)
Genetische informatie
Coderen voor eiwitten
Niet-coderend DNA (‘extra genetisch’)
Junk DNA
Grootste deel van het genoom
Geen fenotypische kenmerken
o Uitzondering: het geslacht
We zoeken naar regio’s in het DNA die verschillen tussen personen
Variabele regio’s in het
DNA = Short Tandem Repeats (STRs)
Identieke, repetitieve units
o Analyse van kleine fragmenten
Zeer polymorf
Merkers selecteren zover mogelijk van elkaar
in het genoom, op verschillende
chromosomen
Geslacht: Amelogenine merker op het
geslachtschromosoom: XX of XY
Locus: plaats op het genoom, waar de merker zich bevindt
Allel: varianten van een merker (aantal repeats)
Homozygoot: allelen op beide chromosomen zijn gelijk
Heterozygoot: Allelen van een bepaalde merker op beide chromosomen zijn verschillend
Opstellen DNA-profiel
, Cellen losweken van de dragen (bv. speekselcellen)
DNA extraheren uit de cellen mvb Chelex
o Chelex: hars, in de oplossing zullen minder ionen zitten
Osmotische kracht: cel neemt water op
Concentratie aan ionen in de cel daalt, en
wordt gelijk aan de concentratie van ionen
buiten de cel
Door de osmotische druk zal de cel barsten
Zachte lyse bij 56°C osmose (cellen komen allemaal op barsten te
staan)
Harde lyse bij kooktemperatuur openbreken cellen en denaturatie
van de proteïnen (DNA is vrijgekomen)
Vrijgekomen DNA beschermen voor afbraak door DNasen
o Afcentrifugeren: zware materiaal (bv. Chelex) op de bodem, DNA opgelost in de
waterige oplossing (= supernatans)
Goed scheiden want Chelex zal ionen capteren die het enzym tijdens de PCR
nodig heeft
DNA vermenigvuldigen adhv PCR:
o Detectie van de DNA-fragmenten mbv capillaire electroforese
o = DNA-amplificatie
o DNA-polymerase nodig (Taq)
Organisme dat bij kooktemperaturen overleeft,
polymerase zal niet denatureren
o Enkelstrengig DNA nodig als ‘template’ voor synthese van
complementaire nieuwe streng
o Klein stukje dubbelstrengig DNA nodig om de polymerase te
starten (primers toevoegen)
Cycli van denaturatie, annealing en elongatie
Denaturatie van een dubbelstrengige helix,
enkelstrengig DNA maken
Annealing: kleine regio’s met nieuw dubbelstrengig DNA wordt gemaakt
Hiervoor primers (enkelstrengig DNA) aangemaakt: zijn
complementair met fragment van template DNA
Temperatuur verlagen naar 58°C zodat enkel de primers kunnen
binden/hybridiseren op het DNA
Polymerase bindt op deze nieuw gevormde stukjes
Annealing T: primers binden = smelttemperatuur v. DNA
Smelttemperatuur v. DNA
o 50% primers gebonden aan DNA
o Afh. v. [C] en [G] gehalte (hebben 3 H-bruggen ipv. 2 H-
bruggen bij A en T)
o Hoe meer H-bruggen, hoe sterker de reactie, hoe meer
energie nodig, hoe hoger smelttemperatuur
Voor elk fragment bij het begin en einde een primer toevoegen
o Smelttemperatuur v. beide primers moet gelijk zijn zodanig
dat er geen aspecifieke bindingen kunnen plaatsvinden
o Tm te laag (tov. Ta) : geen annealing
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller marthevanlerberghe. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.17. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67474 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now